兔免疫球蛋白液相悬浮芯片的制备及制备条件的优化

发布时间：2018-01-21 23:55

  本文关键词： 兔免疫球蛋白 荧光微球 液相悬浮芯片 优化　出处：《中国免疫学杂志》2013年09期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的:制备兔的免疫球蛋白液相悬浮芯片并对其制备条件进行优化,为进一步建立兔免疫球蛋白液相悬浮芯片检测技术提供基础。方法:分别将亲和纯化的兔IgG、IgM和IgA偶联至荧光编码微球,然后优化捕获抗体的偶联量、检测抗体、Streptavidin-PE抗体的最佳工作浓度以及微球-血清反应时间、检测抗体反应时间和Streptavidin-PE抗体反应时间等因素,建立兔IgG、IgM和IgA液相悬浮芯片。结果:1.25×106个荧光微球的最佳偶联抗体浓度分别为10μg IgG、20μg IgM和15μg IgA;biotin标记的IgG、IgM和IgA检测抗体最佳工作浓度分别为2、2和5μg/ml;IgG、IgM和IgA的最佳Streptavidin-PE抗体浓度均为2μg/ml;微球-血清、血清-检测抗体及Streptavidin-PE抗体最佳反应时间分别为60、60和30分钟。结论:制备荧光编码微球兔免疫球蛋白悬浮芯片是可行的方法。
[Abstract]:Objective: to prepare rabbit immunoglobulin liquid suspension microarray and optimize its preparation conditions. Methods: rabbit immunoglobulin IgM and IgA were conjugated to fluorescent coded microspheres respectively. The optimal working concentration of Streptavidin-PE antibody and the reaction time of microspheres and serum were determined. The factors of antibody reaction time and Streptavidin-PE antibody reaction time were determined to establish rabbit IgG. IgM and IgA liquid suspension microarrays. Results the optimal concentration of 10 渭 g IgG IgM and 15 渭 g IgA were 20 渭 g IgM and 15 渭 g IgA of 10 渭 g IgGN 20 渭 g IgM and 15 渭 g IgA, respectively. The best working concentration of biotin labeled IgG biotin IgM and IgA was 2 渭 g / ml and 5 渭 g / ml, respectively. The best concentration of Streptavidin-PE antibody for IgG IgA was 2 渭 g / ml. The optimum reaction time of microsphere and serum, serum-detection antibody and Streptavidin-PE antibody was 60, respectively. Conclusion: it is feasible to prepare a fluorescent coded microsphere rabbit immunoglobulin suspension chip.
【作者单位】： 浙江中医药大学动物实验研究中心/比较医学研究中心;
【基金】：浙江省科技计划项目(2011C37093) 浙江省教育厅重大科技攻关项目(ZD2009004) 浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 液相悬浮芯片技术是一种新型、高通量的生物芯片技术,将流式细胞术、激光技术及应用流体学等技术结合在一起,利用悬浮在液相中的分类荧光编码微球作为检测载体,具有高通量、速度快、灵敏度高、特异性强及检测范围广等特点。近几年来,悬浮芯片技术在免疫学、基因组学、蛋白质

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