穴位埋线治疗过敏性哮喘豚鼠模型的作用机制研究
本文关键词： 过敏性哮喘 豚鼠 穴位埋线 细胞因子 黏附分子 出处：《广州中医药大学》2015年博士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：研究目的：本实验采用卵蛋白致敏法建立过敏性哮喘豚鼠模型,以过敏性哮喘豚鼠为研究对象,观察穴位埋线对过敏性哮喘豚鼠的治疗效应及肺、支气管组织病理学变化,运用HE染色和免疫组织化学方法,观察肺部组织炎症细胞及其细胞分类,分析穴位埋线对肺组织细胞因子IL-21及IL-21R、黏附分子ICAM-1及VCAM-1表达的影响,深入探讨穴位埋线对过敏性哮喘的治疗效应及其作用机制,为穴位埋线防治过敏性哮喘提供实验依据。研究方法：健康豚鼠40只,雌雄各半,体重约230-280g,将所有豚鼠于安静环境中适应性喂养3日后,随机分为：空白组、模型组、穴位埋线组、地塞米松组,每组10只。采用卵蛋白腹腔注射致敏后呼吸道吸入激发法制备哮喘豚鼠模型。除开空白组不作任何干预外,其余各组均进行过敏性哮喘豚鼠造模。第1天用10%的卵蛋白溶液lml进行腹腔注射致敏,然后从第15天开始用1%的卵蛋白溶液进行雾化吸入20min,每天1次,连续两周,直至各豚鼠出现呛咳,躁动,呼吸频率加速,幅度加大,腹肌痉挛等症状则提示造模成功。空白组：不予任何处理,至第30天开始予蒸馏水2m1/只灌胃。模型组：制备哮喘气道重建模型,使大鼠处于致敏状态14d。自第15天起开始雾化吸入1%卵蛋白生理盐水溶液以激发哮喘,隔日1次,每次激发时间为20 min。穴位埋线组：造模豚鼠发作后第二天进行穴位埋线,每次干预均在雾化前30mmin进行。埋线穴位选取大杼、风门、肺俞,8号注射针头和2寸一次性针灸针组成埋线针,注射针头垂直刺入穴位下深度0.5 cm,边退针边用针灸针将羊肠线推入穴位中。7天1次,风门和肺俞穴位左右交替,治疗3次后处死豚鼠,取材检验。地塞米松组：每次雾化前30min给予地塞米松0.5 mg/kg腹腔注射,其余均同模型组。治疗结束后,处死豚鼠,行HE染色及免疫组织化学检测。所有数据均以x±s表示,采用SPSS 19.0统计软件分析数据,进行单因素方差分析,两组比较方差齐性时采用LSD法,方差不齐时采用Dunnett T3法,P0.05为差异有统计学意义。研究结果：1.肺部组织方面,正常对照组豚鼠支气管上皮完整,无明显炎症反应,肺组织亦正常。哮喘豚鼠支气管及血管周围可见大量炎性细胞浸润,以嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞为主,肺间质亦可见到嗜酸性粒细胞浸润。粘膜下层增厚,粘膜皱襞增多,管腔可见狭窄。穴位埋线组及地塞米松组豚鼠经过各自干预后,支气管及肺间质的炎性细胞浸润明显减轻,粘膜下层增厚不明显。2.炎症细胞方面,模型组、穴位埋线组、地塞米松组炎症细胞总数均多于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05)；与模型组比较,穴位埋线组和地塞米松组炎症细胞总数均减少,差异有统计学意义(P0.05),其中Eos为三种炎症细胞中最少的,差异有统计学意义(与Lym、Neu比较,P0.05)；而模型组中,Eos为三种炎症细胞中最多的,差异有统计学意义(与Lym、Neu比较,P0.05),穴位埋线组和地塞米松组均能使Eos数目减少,差异有统计学意义(P0.05)。结果提示过敏性哮喘个体肺组织中存在以Eos为主的炎症细胞浸润,而穴位埋线及地塞米松可明显缓解这种状况。3.细胞因子方面,模型组中IL-21蛋白和IL-21R蛋白的平均光密度值和阳性面积率远高于正常组,差异有统计学意义(P0.001)。地塞米松组和穴位埋线组分别与模型组比较,IL-21蛋白和IL-21R的平均光密度值和阳性面积率明显减少,差异有统计学意义(P0.01),且穴位埋线组与地塞米松组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结果提示,经治疗后,地塞米松和穴位埋线能减少IL-21蛋白和IL-21R蛋白的表达,而穴位埋线在减少相关细胞因子表达方面不及地塞米松作用强。4.黏附分子方面,模型组中ICAM-1和VCAM-1的平均光密度值和阳性面积率明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.001)。地塞米松组和穴位埋线组分别和模型组比较,ICAM-1和VCAM-1的平均光密度值和阳性面积率均明显减少,差异有统计学意义(P0.01),且穴位埋线组与地塞米松组比较,差异有统计学意义(P0.01),结果提示,经治疗后,地塞米松和穴位埋线能减少黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,但穴位埋线在减少相关黏附分子方面不及地塞米松作用强。研究结论：1.过敏性哮喘会影响豚鼠的肺部组织,引起相关病理反应,出现炎性细胞浸润以及支气管粘膜下层增厚,粘膜皱襞增多,管腔狭窄,而穴位埋线及地塞米松均能缓解过敏性哮喘豚鼠肺部组织的病理表现。并且地塞米松及穴位埋线均能减少炎症细胞在哮喘豚鼠肺部组织的浸润及肺部组织的改变,从而缓解过敏性哮喘对肺部组织的造成的病理改变。2.过敏性哮喘导致的炎性细胞浸润中,以嗜酸性粒细胞增多为主,穴位埋线及地塞米松均能有效减少嗜酸性粒细胞数目,地塞米松组与穴位埋线组作用相当。地塞米松及穴位埋线均对过敏性哮喘有治疗作用。3.对于过敏性哮喘导致的相关细胞因子、黏附分子表达增多,促进肺部炎症反应,穴位埋线及地塞米松均有治疗效应,能减少相关细胞因子、黏附分子的表达,且地塞米松组疗效好于穴位埋线组。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R245;R-332
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