p53基因启动子转录活性检测细胞模型的建立

发布时间：2018-03-21 15:35

  本文选题：p基因启动子　切入点：转录活性　出处：《广州中医药大学学报》2013年02期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：【目的】构建p53基因启动子靶控报告基因细胞模型,为高通量筛选出以p53为靶标的中药提供新的细胞模型。【方法】采用瞬时转染报告基因测定法,确定最佳转染方案及p53基因启动子转录活性细胞模型的建立和验证,观察p53抑制剂PFT-a、血清饥饿、过氧化氢、自噬激活剂雷帕霉素对p53基因启动子转录活性PC12细胞模型的量效和时效关系。【结果】PFT-α诱导3 h,对p53基因启动子转录活性抑制率达50%左右;血清饥饿诱导12、24、36 h,p53基因启动子转录活性是对照组的1.6倍;过氧化氢300μmol/L诱导9 h,p53基因启动子转录活性是对照组的1.3倍;雷帕霉素在浓度为0.1、1 nmol/L可上调p53基因启动子转录活性,呈浓度依赖性,而5 nmol/L及更高浓度可下调p53基因启动子转录活性。【结论】成功建立采用p53基因启动子报告基因检测p53基因启动子转录活性的特异性细胞模型,血清饥饿、过氧化氢、雷帕霉素可诱导p53基因启动子的转录活性。
[Abstract]:[objective] to construct a target controlled reporter gene cell model of p53 gene promoter, and to provide a new cell model for high throughput screening of Chinese medicine targeting p53. [methods] transient transfection reporter gene assay was used. The optimal transfection protocol and the establishment and validation of p53 gene promoter transcriptional active cell model were determined. The p53 inhibitor PFT-a, serum starvation, hydrogen peroxide were observed. The dose-effect and time-dependent relationship of autophagy activator rapamycin on PC12 cell model of p53 gene promoter transcriptional activity. [results] the inhibition rate of p53 promoter transcription activity was about 50% when induced by PFT- 伪 for 3 h. The transcriptional activity of p53 gene promoter induced by serum starvation was 1.6 times higher than that of the control group, the activity of p53 gene promoter induced by hydrogen peroxide 300 渭 mol/L was 1.3 times higher than that of the control group, and rapamycin could up-regulate the transcription activity of p53 gene promoter at the concentration of 0.1 nmol/L. In a concentration-dependent manner, 5 nmol/L and higher concentration could down-regulate the transcriptional activity of p53 promoter. [conclusion] A specific cell model for detecting p53 promoter transcriptional activity by p53 promoter reporter gene was successfully established. Hydrogen peroxide and rapamycin can induce the transcriptional activity of p53 promoter.
【作者单位】： 广州中医药大学解剖学教研室;广州中医药大学中药学院;广州中医药大学新药开发研究中心;广州中医药大学第一附属医院;
【基金】：广东省自然科学基金项目(编号:S2012010010406);广东省自然科学基金博士启动项目(编号:S2011040004778) 广东省中医药管理局资助项目(编号:20112132)
【分类号】：R-332

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 郑延松,李源,张珊红,龚卫琴,孙斌;用低浓度过氧化氢建立心肌细胞氧化损伤模型[J];第四军医大学学报;2001年20期

2 丁睿;韩霜;雷婷;刘杰;窦科峰;;Id1启动子的荧光素酶报告基因载体的构建及其在肝癌HepG2细胞中的活性检测[J];第四军医大学学报;2007年09期

3 张海玲;叶茂盛;郑二来;陈东风;华子春;;ID1启动子的构建及其在不同细胞系中的表达[J];解剖学研究;2011年04期

4 杨鹏宇;张建生;;mTOR抑制剂治疗胶质瘤的研究进展[J];国际神经病学神经外科学杂志;2009年06期

5 吴顺华;钟彦伟;成军;郑玉建;;筛选肝细胞p53启动子结合蛋白的噬菌体表面展示技术[J];环境与健康杂志;2011年07期

6 吴永青,刘彦文,邱鹏新,张清秀,葛坚;bcl-2基因转染PC12细胞及其神经保护作用的研究[J];解剖学报;2002年04期

7 易香华;吴静;侯秋科;邓汝东;张赛霞;李伊为;陈东风;黎晖;周健洪;孟冬雪;张海玲;;龟板促进Parkinson病大鼠黑质骨形态发生蛋白信号分子的表达[J];神经解剖学杂志;2009年05期

8 张斌;夏作理;赵晓民;张和平;;氧化应激模型的建立及其评价[J];中国临床康复;2006年44期

9 赵景辉;孙秋宁;闫岩;李军;;常见皮肤癣菌体外药物敏感试验的研究[J];中国真菌学杂志;2006年04期

10 鲍迎秋;万U，

本文编号：1644482