丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶对Nrf2通路的影响及机制研究

发布时间：2018-04-01 17:03

  本文选题：Nrf2　切入点：Mkp1　出处：《浙江大学》2015年博士论文

【摘要】：转录因子红细胞系-2 p45相关因子-2 (NF-E2 p45-related Factor 2, Nrf2)通过上调Ⅱ相解毒酶和抗氧化蛋白,介导抗氧化反应,使细胞免受活性氧(ROS)、亲电子化合物、细菌等外来物质的损害；Mkpl (DUSP1)通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)也在应激反应和炎症反应中起关键调控作用。但这两个信号通路是否相关,目前尚无报道。为了明确Nrf2和Mkpl之间的调控作用及机制,以及这种相互作用在整体动物体内的生物学意义,本课题利用WT, Nrf2-/-小鼠和Mkpl-/-三种不同基因型动物,分别在亲电子化合物叔丁基羟基茴香醚(Butylated hydroxyanisole, BHA),莱菔硫烷(Sulforaphane, SFN)处理下和脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)诱导炎症病理状态下用Taqman, Western blot,免疫组化和Co-IP等方法,从分子水平,细胞水平,组织学水平和整体动物水平,探讨了Mkpl与Nrf2/ARE信号通路关键分子的关系。本课题一方面用200 mg/kg BHA或25mg/kg SFN处理WT, Nrf2-/-小鼠和Mkp1-/-小鼠,从mRNA水平,蛋白水平和组织学方面研究发现小鼠肝脏和小肠中,BHA或SFN能通过激活Nrf2,增加下游基因Nqo1, Gstml的表达,提高GSH水平。组织学上Nrf2和Nqo1,主要分布于小鼠肝脏的中央静脉周围和小肠绒毛。BHA或SFN能诱导WT小鼠肝脏中Nrf2入核增加,使Mkpl升高,进一步促进Nrf2下游Nqo1, Gstml, Akrlb8和Hol的表达,而Mkpl-/-小鼠体内BHA或SFN对Nrf2/ARE信号通路的诱导作用明显减弱。说明Mkp1对BHA或SFN诱导Nrf2/ARE信号通路有调控作用。另外,Nrf2-/-小鼠体内Mkp1的表达也较WT鼠显著降低,说明Nrf2对Mkp1也具有调节作用。另一方面,我们用LPS分别处理Raw264.7细胞株和WT, Nrf2-/-和Mkp1-/--三种不同基因型小鼠,从mRNA水平,蛋白水平和组织学方面检测,发现Mkp1能与Nrf2结合,在蛋白水平对Nrf2/ARE信号通路调控,并影响炎症因子的产生。本课题从细胞水平和整体水平明确了Mkp1和Nrf2相互作用,发现了Mkp1-Nrf2是氧化应激和炎症反应中重要的信号通路。
[Abstract]:Transcription factor RBC cell line -2 p45 related factor 2 NF-E2 p45-related Factor 2 (Nrf2) mediated antioxidant reaction by up-regulating phase 鈪，

本文编号：1696462