结核分枝杆菌蛋白抗原刺激人γδT细胞的活性单位的计算方法

发布时间：2018-04-16 06:45

  本文选题：结核分枝杆菌 + γδT细胞　； 参考：《免疫学杂志》2013年04期

【摘要】：目的以检测和计算结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)蛋白抗原激活人γδT细胞增殖的活性单位为指标,比较不同提取分离方法制备的Mtb抗原制剂激活人γδT细胞的活性效价。方法培养的Mtb-H37Ra菌株通过高温和超声方法处理,分别获取Mtb耐热抗原(Mtb-HAg)和超声处理抗原(Mtb-SoAg),采用超滤离心管(3 K,10 K,30 K)和快速液相蛋白层析(FPLC)分组和分离,获取不同相对分子质量组分的抗原。采集健康成年人外周血分离获取PBMC,加入不同质量浓度梯度的Mtb蛋白抗原或其分离组分,并加IL-2培养12 d后荧光抗体染色,流式细胞仪检测和分析扩增T细胞中γδT细胞的比例,以扩增γδT细胞最高比例的50%(EC50)所对应的质量浓度计算为1个活性单位。结果用活性单位计算法分析发现,某批次的Mtb-HAg(591μg/ml)刺激γδT细胞扩增的EC50为1.4μg/ml,计算其活性单位为0.71 U/μg;某批次低分子Mtb-SoAg(3 K～10 K)(221μg/ml)的EC50为0.8μg/ml,其活性单位为1.25 U/μg。结论通过比较Mtb蛋白抗原不同批次及其不同组分在不同质量浓度下刺激γδT细胞扩增数量的活性,可以计算获得相应的活性单位,为检测Mtb蛋白抗原制剂刺激γδT细胞增殖活性建立了标准化的计算方法。
[Abstract]:Objective to detect and calculate the active units of Mycobacterium tuberculosism Mtb protein antigen activated proliferation of human 纬 未 T cells, and compare the activity titers of human 纬 未 T cells activated by Mtb antigens prepared by different extraction and isolation methods.Methods the cultured Mtb-H37Ra strains were treated with high temperature and ultrasound respectively. The Mtb heat-resistant antigen (Mtb-HAg) and ultrasonic treated antigen (Mtb-SoAgG) were obtained. The cells were grouped and separated by ultrafiltration centrifuge tube (3K) and rapid liquid phase protein chromatography (FPLC).The antigens of different molecular weight components were obtained.PBMCs were isolated from the peripheral blood of healthy adults. Mtb antigen or its components were added with different concentration gradient. After 12 days of IL-2 culture, fluorescent antibodies were stained. The proportion of 纬 未 T cells in T cells was detected and analyzed by flow cytometry.The mass concentration corresponding to the highest proportion of 纬 未 T cells was calculated as an active unit.Results the EC50 of 纬 未 T cells stimulated by a batch of Mtb-HAg(591 渭 g / ml was 1.4 渭 g / ml, and its active unit was 0.71 U / 渭 g / 渭 g, and the EC50 of a batch of low-molecular-weight Mtb-SoAg(3 10 KG / ml (221 渭 g / ml) was 0.8 渭 g / ml, and its active unit was 1.25 U / 渭 g / 渭 g.Conclusion by comparing the activity of different batches and different components of Mtb protein antigen stimulated 纬 未 T cell proliferation at different concentrations, the corresponding active units can be obtained.In order to detect the proliferative activity of 纬 未 T cells stimulated by Mtb protein antigen preparation, a standardized calculation method was established.
【作者单位】： 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室;
【基金】：卫生部重大传染病专项(2012ZX10003006-004)
【分类号】：R392.12

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