SENP1对NK92细胞生物学特性的影响

发布时间：2018-04-17 00:23

本文选题：NK92细胞 + K562细胞　；参考：《安徽医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)细胞是一种是机体重要的免疫细胞,其增殖、成熟和存活等生物学特性受细胞内外复杂的信号调控。细胞信号分子的调控除了受磷酸化等调控外,蛋白水平的翻译后修饰也非常重要。小类泛素化修饰(small ubiquitin-like modifier,SUMO)蛋白化修饰是一种重要的蛋白翻译后修饰方式,影响细胞转录因子的活性和细胞信号的传导。SUMO特异性蛋白酶1(SUMO-specific proteinase 1,SENP1)是一个调控蛋白SUMO化的重要蛋白酶,能够促进SUMO的成熟和将SUMO分子与蛋白解离,通过调控细胞信号蛋白稳态而影响细胞的增殖、分化和周期。已知SENP1调控低氧诱导因子HIF等影响红系造血细胞的生成,但其对NK细胞生物学特性影响并不清楚。白细胞介素21(IL-21)是近年来新发现的一种细胞因子,主要由激活的CD4+细胞产生。NK细胞IL-21R在静息和激活状态下的NK细胞都有表达,IL-21对NK细胞的增殖和功能起到调节作用。但SENP1是否参与IL-21的信号转导及调控NK细胞的生物学特性作用有待阐明。本文从IL-21对NK细胞SENP1的表达调控及其对增殖、存活和杀伤活性等方面进行了阐述。研究目的:(1)观察IL-21对NK92细胞表达SENP1的诱导作用(2)检测干涉SENP1对NK92细胞凋亡、增殖的影响(3)探究干涉SENP1对NK92细胞杀伤活性的影响。研究方法:(1)在缺乏IL-2的培养体系中加入IL-21刺激NK92细胞,用CCK8试剂盒检测不同时间点细胞的增殖情况;用利用Annexin V-APC/PI标记检测细胞的凋亡;并使用qRT-PCR、免疫印迹的方法检测SENP1在NK92细胞中的表达情况。(2)使用携带Senp1-shRNA的慢病毒感染NK92细胞后,使用流式细胞仪以及荧光显微镜检测感染效率,并同时使用qRT-PCR、免疫印迹的方法确认干涉效率。(3)以感染对照病毒的NK92细胞为参照,使用慢病毒shRNA干涉Senp1后利用CCK8试剂盒检测不同时间点NK92细胞系的增殖情况,利用Annexin V-APC/PI标记细胞,流式细胞术检测干涉Senp1后NK92细胞凋亡。(4)使用慢病毒shRNA干涉Senp1后用qRT-PCR方法检测杀伤因子的表达。(5)将带荧光素酶标记的K562细胞与NK92细胞共培养,用荧光素酶报告基因的方法检测NK92细胞的杀伤活性。研究结果:(1)IL-21刺激能够明显上调NK92细胞表达SENP1,并且IL-21上调NK92细胞表达SENP1具有量效关系。(2)IL-21抑制NK92细胞的凋亡,能够减缓乏IL-2导致的NK92细胞死亡的数目,且与IL-21的浓度具有相关性。(3)与感染对照病毒NK92细胞比较发现,在感染慢病毒shRNA后,NK92细胞Senp1在mRNA表达降低,差异具有统计学意义;在蛋白水平中,SENP1的表达也受到了明显的抑制。(4)慢病毒感染细胞凋亡24h,Senp1干涉组细胞凋亡率与对照组比较,干涉Senp1可以促进NK92细胞凋亡。(5)使用CCK8方法检测细胞的增殖变化后发现干涉Senp1后可以显著抑制NK92细胞增殖,差异具有统计学差异。(6)与病毒感染对照组比较,Senp1干涉组NK92细胞对K562细胞的杀伤活性增强,颗粒酶B、IFN-γ表达降低,穿孔素的表达显著升高。结论:IL21能够提高NK92细胞表达SENP1,抑制NK92细胞的凋亡,减少乏IL-2导致的NK92死亡的数目。干涉Senp1不仅促进NK92细胞凋亡,还能抑制增殖,同时影响穿孔素表达和对肿瘤细胞的杀伤活性。
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【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R392

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