人SUMO-2 shRNA干扰表达载体构建及其对细胞增殖的影响

发布时间：2018-04-30 04:13

  本文选题：shRNA干扰 + SUMO-　； 参考：《中国现代医学杂志》2013年28期

【摘要】：目的构建干扰人SUMO-2表达的shRNA重组质粒载体,并筛选下调人SUMO-2表达的稳定细胞株。方法设计并合成针对人SUMO-2的shRNA寡核苷酸,并将其克隆至pLKO.1质粒载体上,转染HCT116细胞后经嘌呤霉素筛选获稳定表达细胞株,并通过免疫印迹鉴定SUMO-2的表达。结果成功构建干扰人SUMO-2表达的pLKO.1质粒载体,可在HCT116细胞中稳定表达,且能有效抑制SUMO-2蛋白质的表达。功能研究初步证明干扰SUMO-2表达可抑制细胞增殖并使处于细胞周期G1期的细胞比例上升。结论获得了干扰人SUMO-2表达的pLKO.1-shRNA质粒载体,以及下调SUMO-2表达的HCT116稳定细胞株。
[Abstract]:Objective to construct a recombinant shRNA plasmid that interferes with the expression of human SUMO-2 and to screen a stable cell line that can down-regulate the expression of human SUMO-2. Methods shRNA oligodeoxynucleotides targeting human SUMO-2 were designed and synthesized and cloned into pLKO.1 plasmid vector. After transfection into HCT116 cells, a stable expression cell line was obtained by purine mycin screening, and the expression of SUMO-2 was identified by Western blot. Results the pLKO.1 plasmid vector which interfered with the expression of human SUMO-2 was successfully constructed, which could be stably expressed in HCT116 cells and could effectively inhibit the expression of SUMO-2 protein. Functional studies showed that interfering with SUMO-2 expression could inhibit cell proliferation and increase the proportion of cells in G1 phase of cell cycle. Conclusion the pLKO.1-shRNA plasmid vector which interferes with the expression of human SUMO-2 and the stable cell line of HCT116 which can down-regulate the expression of SUMO-2 were obtained.
【作者单位】： 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所(创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第一研究室);
【基金】：创伤烧伤与复合伤国家重点实验室基金(No:SKLZZ200907) 国家自然科学基金(No:30970651)
【分类号】：R341

【共引文献】

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本文编号：1823016