恶性疟原虫Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达策略的研究
本文选题：恶性疟原虫 + Pfs蛋白 ； 参考：《中国新药杂志》2013年22期
【摘要】：目的:探索Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达策略,提高Pfs25蛋白的表达量。方法:本研究主要通过4个方面深入研究Pfs25蛋白的高效表达策略。①构建Pfs25蛋白的诱导型表达重组株pPICZαA-Pfs25/GS115和组成型表达重组株pGAPZαA-Pfs25/GS115,并比较两酵母菌株的表达量差异。②从培养基、pH值、表达时间等方面入手,分别对诱导型和组成型分泌表达条件进行研究,寻找适合Pfs25蛋白表达的最佳条件。③利用pAO815表达载体构建Pfs25多拷贝重组酵母菌株pAO815-(α-Pfs25)n/GS115,通过提高pfs25基因拷贝数来提高表达量。④将毕赤酵母中蛋白二硫键异构酶(PDI)基因引入Pfs25重组酵母中,以提高Pfs25蛋白的分泌表达。结果:本研究成功构建了Pfs25诱导型和组成型表达重组酵母菌株,实现了Pfs25的诱导型和组成型表达,组成型表达量略高于诱导型。并通过对各种表达条件的比较研究,找到了适合Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达的条件。结论:通过对Pfs25蛋白高效表达策略的研究,显著提高了Pfs25蛋白在毕赤酵母中的分泌表达水平,使其表达量提高了约5倍。
[Abstract]:Aim: to explore the strategy of Pfs25 protein secretion and expression in Pichia pastoris, and to improve the expression of Pfs25 protein in Pichia pastoris. Methods: in this study, the high expression strategy of Pfs25 protein was studied in four aspects. 1. Construction of pPICZ 伪 A-Pfs25/GS115 and pGAPZ 伪 A-Pfs25 / GS115, and comparison of the expression levels between the two yeast strains. (2) from the pH value of culture medium, In terms of expression time and other aspects, the expression conditions of inducible and constitutive secretory expression were studied respectively. To find the best conditions for Pfs25 protein expression using pAO815 expression vector to construct Pfs25 multi-copy recombinant yeast strain pAO815-( 伪 -Pfs25N / GS115. by increasing the copy number of pfs25 gene to increase the expression quantity of pAO815-Pfs25n- GS115. Because of the introduction of Pfs25 recombinant yeast, To increase the secretory expression of Pfs25 protein. Results: the recombinant yeast strains of Pfs25 inducible and constitutive expression were successfully constructed, and the inducible and constitutive expression of Pfs25 was realized, and the amount of constitutive expression was slightly higher than that of inducible type. Through the comparative study of various expression conditions, we found suitable conditions for the efficient secretion and expression of Pfs25 protein in Pichia pastoris. Conclusion: through the study of high expression strategy of Pfs25 protein, the secretory expression level of Pfs25 protein in Pichia pastoris was significantly increased, and the expression of Pfs25 protein in Pichia pastoris was increased by about 5 times.
【作者单位】： 国药兰州生物制品研究所有限责任公司;
【分类号】：R392
【参考文献】
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【共引文献】
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