从系统疫苗学的角度动态评价卡介苗免疫机制

发布时间：2018-05-14 21:25

本文选题：BCG + 神经-免疫调控网络　；参考：《吉林农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：系统疫苗学能够在RNA、蛋白质水平整体了解疫苗潜在的分子机制,从而有效预测疫苗的免疫效果。神经-免疫调控网络是机体维持内环境稳态的重要机制,免疫系统和神经系统通过肽类激素、神经递质和细胞因子等的相互作用,共同构成机体的防御体系,保证机体能够对内外刺激作出及时和准确的应答。从神经-免疫调控网络的角度应用系统疫苗的原理研究疫苗诱导机体的免疫效应,能够更加全面的分析免疫后各指标间的调控关系。卡介苗(Bacillus Calmettee-Guerin,BCG)作为目前世界上唯一得到许可并被广泛应用的结核病疫苗,是人们预防结核病(tuberculosis,TB)的重要手段之一。然而随着接种人群扩大、接种时间延长,BCG接种所产生的弊端也逐渐被发现,新型抗结核疫苗的研发难题亟待解决。应用系统疫苗学的方法全面深入的理解BCG诱导机体产生免疫效应的机制,才能在此基础上做更进一步的研发工作。本研究首先利用M7H9肉汤培养基培养卡介苗,成功获得了符合中国药典规定的卡介苗菌株。将培养的卡介苗稀释至5×105CFU/100μL,在小鼠足部及尾根部注射,于不同时间点采集外周血、下丘脑、脾脏及引流淋巴结样本。应用ELISA方法检测免疫后各周小鼠血清特异性抗体效价水平,流式细胞术检测脾脏和引流淋巴结T细胞亚群含量,应用RT-PCR方法对下丘脑、脾脏和引流淋巴结的瘦素和辅助性T细胞的细胞因子水平进行检测,进而对各指标间联系进行分析。经过对BCG免疫后小鼠神经系统和免疫系统的研究,为我们更深入了解BCG的免疫机制提供实验依据,同时也为新型结核疫苗的开发奠定基础。具体实验结果如下:1、本研究采用ELISA方法检测IgG抗体效价,设置波长492nm处效价为纵坐标,取样时间为横坐标,绘制抗体效价水平曲线。小鼠在BCG免疫1周后,血清中IgG水平逐渐上升,到第5周抗体OD600检测值基本维持在0.4左右,说明BCG免疫能保持长时间的高水平抗体效价。2、免疫后小鼠于各周采集样品用于流式检测T细胞亚群含量,淋巴结在免疫后显著增生,而T细胞水平显著下降,说明增生以B细胞或其他免疫细胞为主,而且免疫后CD4+/CD8+没有显著变化。说明BCG能同时引发引流淋巴结CD4+、CD8+应答,BCG免疫后主要引起脾脏产生CD4+T细胞应答。3、流式检测Treg含量结果表明,BCG免疫后引起淋巴结Treg细胞水平显著升高,且持续时间长,脾脏中Treg细胞水平仅短暂升高。这一结果可能与脾脏和淋巴结中BCG菌体含量不同有关,也可能与BCG引起两者不同的炎性反应有关。4、应用RT-PCR方法检测各组织中瘦素及瘦素受体表达量。免疫后,下丘脑与引流淋巴结的瘦素和瘦素受体表达量变化趋势大致相同,免疫后瘦素水平极显著高于对照组,之后逐渐降低。在脾脏中,BCG免疫后各周瘦素表达量均低于对照组,而瘦素受体表达量于各周均无显著性变化。说明在BCG免疫后淋巴结为主要的免疫应答器官,且下丘脑与引流淋巴结的调控呈相关性。5、BCG免疫后对下丘脑、脾脏及引流淋巴结Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ进行检测,结果表明,在脾脏中主要引发Th1型细胞因子应答,在淋巴结中主要引发IFN-γ应答,且下丘脑与免疫器官间关于Th1型细胞因子的调控相关关系。6、BCG免疫后对下丘脑、脾脏及引流淋巴结Th2型细胞因子IL-4和IL-10进行检测,结果表明,BCG免疫主要引起引流淋巴结IL-4应答。7、BCG免疫后对下丘脑、脾脏及引流淋巴结Th17型细胞因子IL-17A进行检测。免疫主要引发引流淋巴结中Th17型细胞应答,而且引流淋巴结关于IL-17A的应答与下丘脑之间具有一定的调节作用。8、BCG免疫后对下丘脑、脾脏及引流淋巴结炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α进行检测。免疫能够引发脾脏和引流淋巴结发生不同程度和时间的炎性反应,且各细胞因子表达量与下丘脑之间具有一定的调节作用。综上所述本研究从系统疫苗学的角度在神经-免疫层面对免疫BCG的小鼠进行了检测,经血清特异性抗体检测、T细胞亚群含量分析、Treg细胞含量检测、瘦素水平检测及免疫相关细胞因子的检测实验,验证了BCG免疫对机体的整体影响,为进一步探索BCG免疫诱导的免疫机制以及新型结核疫苗的研制提供了实验依据,并为日后的深入研究奠定了基础。
[Abstract]:The results of this study were as follows : 1 . The effect of BCG on the immune response of mice was studied . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . The effect of BCG on immune system was studied . The levels of serum leptin and leptin receptor in the hypothalamus , spleen and draining lymph nodes were detected by RT - PCR . The results showed that the levels of leptin and leptin receptor in the hypothalamus , spleen and drainage nodes were significantly higher than those in the control group .

【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R392

【参考文献】