川芎嗪衍生物对CXC195对6-OHDA致帕金森小鼠模型的保护作用及机制

发布时间：2018-05-25 16:04

  本文选题：川芎嗪衍生物CXC195 + 6-羟基多巴胺　； 参考：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：[研究背景及目的]帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种即阿尔兹海默症(Alzheimer's disease,AD)之后较为常见的中枢神经系统疾病,呈进行性退行改变,严重危害人类健康。因此,探究导致PD的发病机制,找出可以直接作用于PD关键靶点的医治药物,无论在理论基础还是临床应用方面均具有非常重要的意义。黑质纹状体内多巴胺(dopamine,DA)能神经元细胞凋亡(apoptosis)致使其缺失是引发PD的一个首要机制。最近的研究已经表明,丝氨酸/苏氨酸激酶Akt的磷酸化抑制糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)活性,能够减弱6-羟基多巴胺(6-hydroxyldopamine,6-OHDA)致PD模型中多巴胺能神经元的凋亡。化合物CXC195是我校药学院刘新泳教授团队新研制的一种川芎嗪烃基哌嗪类衍生物。我们前期的研究结果显示,CXC195能明显抑制脑缺血引发的细胞凋亡。但是,CXC195对PD的作用及机制未见报道。本次课题初次探究CXC195是否对6-OHDA致PD小鼠模型的DA能神经元具有保护作用,以及CXC195是否通过PI3K/Akt/GSK-3β相关信号转导通路抑制DA能神经元细胞凋亡。[方法]1.CXC195对6-OHDA致PD小鼠模型的DA能神经元的保护作用选择雄性C57BL/6健康小鼠,于右侧纹状体内注射6-OHDA构建PD模型,模型制备后每日腹腔注射不同剂量的CXC195(10mg/kg、3 mg/kg、1 mg/kg),分别检测下列指标:1.1分别于7d、14d阿扑吗啡皮下注射诱导,进行旋转行为学检测。1.2于14 d取纹状体,通过液相质谱联用系统(LC/MS)测定纹状体DA浓度。1.3于14 d取小鼠黑质和纹状体,以蛋白印迹法(Western blot)检测酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase,TH)含量。1.4通过免疫组化漂染方法观察DA能神经元TH的蛋白水平。1.5通过TUNEL染色标识法观察黑质内DA能神经元的细胞凋亡。1.6通过Western blot检测与凋亡信号通路有关的Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白表达水平的改变。1.7 通过 Western blot 检测黑质内 p-Akt(Ser 473)和 p-GSK-3β(Ser 9)的水平。2.CXC195通过PI3K/Akt/GSK-3 β信号转导通路,减少DA能神经元细胞凋亡。由于CXC195可显著上调6-OHDA致PD小鼠模型中黑质Akt蛋白Ser 473位点和GSK-3β蛋白Ser 9位点磷酸化,所以使用PI3K特异性抑制剂Wortmannin抑制Akt磷酸化来研究CXC195抗凋亡的作用是否通过激活Akt实现的。2.1 通过 Western blot 检测黑质内 p-Akt(Ser 473)和 p-GSK-3β(Ser 9)的水平。2.2 通过TUNEL染色标记法测定小鼠PD模型黑质内细胞凋亡的含量变化。2.3通过Western blot测定与凋亡有关的Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白表达水平。[结果]1.CXC195明显减少6-OHDA诱导PD模型小鼠向左侧旋转的次数。2.CXC195增加6-OHDA诱导PD模型小鼠纹状体内DA的含量。3.CXC195改善6-OHDA诱导PD模型小鼠纹状体和黑质中TH的缺失。4.CXC195减少6-OHDA诱导PD小鼠模型黑质DA能神经元细胞凋亡。5.CXC195抑制6-OHDA引起的PD小鼠模型黑质Bcl-2下调、Bax上调及caspase-3 活化。6.CXC195上调6-OHDA诱导的PD小鼠模型Akt蛋白Ser473位点和GSK-3β蛋白Ser 9位点磷酸化。7.PI3K抑制剂通过阻断PI3K/Akt/GSK-3β信号通路抑制CXC195对6-OHDA诱导的PD小鼠的抗凋亡作用。[结论]CXC195 通过其抗凋亡特性和参与调控PI3K/Akt/GSK-3β信号通路,保护6-OHDA致PD模型DA能神经元的损伤。
[Abstract]:The research background and purpose of Parkinson ' s disease ( PD ) is a common central nervous system disease after Alzheimer ' s disease ( AD ) . 1 . The level of apoptosis in the nigra of PD model mice was determined by Western blot .
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R-332

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