β-catenin和突变体ΔN90腺病毒载体的构建及其在MSCs中的表达

发布时间：2018-06-04 09:49

  本文选题：腺病毒载体 + β-catenin　； 参考：《生物技术通报》2013年11期

【摘要】：旨在研究β-catenin对MSCs迁移的作用,构建β-catenin和突变体ΔN90的重组腺病毒载体,在MSCs中验证其表达情况。将目的基因定向克隆到pAdTrack-CMV穿梭载体上,并经PmeⅠ线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组,获得重组腺病毒载体,在QBI-293A细胞中包装和扩增。结果显示,酶切和测序证实Ad-β-catenin和Ad-ΔN90质粒构建正确,荧光显微镜可观察到GFP的表达,并选出150 MOI为最适感染MSCs的感染复数,Western blot检测到Ad-β-catenin和Ad-ΔN90都能增加β-catenin的蛋白表达量,TOPFlash检测到Ad-β-catenin和Ad-ΔN90都能增加β-catenin的转录活性。说明成功构建Ad-β-catenin和Ad-ΔN90腺病毒载体,并获得高滴度病毒子。
[Abstract]:In order to study the effect of beta -catenin on MSCs migration, the recombinant adenovirus vector of beta -catenin and mutant Delta N90 was constructed and its expression was verified in MSCs. The target gene was cloned on the pAdTrack-CMV shuttle vector, and after Pme I linearization, the recombinant adenovirus vector was reorganized in BJ5183 bacteria with the pAdEasy-1 skeleton plasmid, and the recombinant adenovirus vector was obtained. It was packed and amplified in QBI-293A cells. The results showed that the construction of Ad- beta -catenin and Ad- Delta N90 plasmid was correct by enzyme digestion and sequencing. The expression of GFP was observed by fluorescence microscope, and 150 MOI was selected as the most suitable infection complex of MSCs, and Western blot detected that both Ad- beta -catenin and delta delta could increase the protein expression of beta. Both Ad- beta -catenin and Ad- Delta N90 could increase the transcriptional activity of beta -catenin, indicating the successful construction of Ad- beta -catenin and Ad- Delta N90 adenovirus vector and high titer virion.
【作者单位】： 苏州大学基础医学与生物科学学院江苏省干细胞研究重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30870642,31071220)
【分类号】：R346

【参考文献】

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