慢病毒转染人角质形成细胞高表达核纤层蛋白B1

发布时间：2018-06-04 15:20

  本文选题：人角质形成细胞 + 慢病毒　； 参考：《第三军医大学学报》2013年09期

【摘要】：目的通过对慢病毒载体稳定转染人角质形成细胞(HaCaT)株和未转染HaCaT细胞进行比较蛋白组学分析,找出其差异表达蛋白,寻找基因修饰组织工程表皮种子细胞生长特性改变的原因和可能存在的成瘤性安全隐患。方法选择慢病毒载体稳定转染后生长特性发生明显改变的转染株细胞,采用二维电泳技术对该转染株和未转染株的总蛋白进行分离和比较,找出差异表达蛋白点,再进行串联质谱鉴定。从鉴定得到的差异蛋白中选择可能与细胞生长特性改变和肿瘤生成相关的核纤层蛋白B1(lamin B1)采用Western blot和实时荧光定量PCR技术(qPCR)对其表达差异进行验证。结果与未转染株比较,转染株在二维电泳中存在11个差异表达蛋白点,质谱从其中鉴定出7个蛋白质。选取其中与细胞增殖和凋亡相关的核纤层蛋白B1通过WB和qPCR证实其在转染株中蛋白和转录水平均存在明显的高表达。结论慢病毒载体稳定转染株HaCaT细胞株相对未转染株核纤层蛋白B1高表达。这种高表达可能与转染株细胞生长特性改变和潜在的成瘤性隐患相关。
[Abstract]:Objective to find out the differentially expressed protein of lentivirus vector in stable transfection of human keratinocytes (HaCaT) and untransfected HaCaT cells by comparative proteomic analysis. To find out the cause of the change of seed cell growth characteristics and the potential safety hidden danger of tumorigenesis in genetically modified tissue engineering epidermis. Methods two dimensional electrophoresis technique was used to isolate and compare the total proteins of lentivirus vector transfected cells with obvious changes in growth characteristics, and the differentially expressed protein sites were found out. Then tandem mass spectrometry was performed. B1(lamin B1, which may be related to the change of cell growth and tumorigenesis, was selected from the differential protein identified to verify the difference in expression by Western blot and real-time fluorescence quantitative PCR. Results compared with the untransfected strain, there were 11 differentially expressed protein spots in the transfected strain, and 7 proteins were identified by mass spectrometry. Nuclear laminin B1, which is related to cell proliferation and apoptosis, was confirmed to be highly expressed in the transfected cell line by WB and qPCR. Conclusion lentivirus vector stably transfected HaCaT cell line has higher expression of laminin B1 than that of untransfected cell line. This high expression may be associated with changes in cell growth characteristics and potential tumorigenicity of transfected cell lines.
【作者单位】： 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81071575) 国家重点实验室自主研究课题Ⅰ类(SKLZZ200904)~~
【分类号】：R373

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本文编号：1977861