hHCN4基因修饰的大鼠BMSCs与心肌细胞共培养分化为心肌样细胞的实验研究

发布时间：2018-07-27 17:44

【摘要】：目的将超级化环化核苷酸门控阳离子通道4(hHCN4)基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞(CM)进行共培养,观察其细胞连接功能及起搏功能。方法分离培养乳鼠CM并进行细胞标记,将已标记的CM分别与大鼠BMSCs、hHCN4+BMSCs及hHCN4-BMSCs混合培养。共培养4d后检测各组细胞的自发搏动频率,荧光显微镜下观察两类细胞的空间位置关系,Western blotting检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达,透射电镜观察细胞间缝隙连接的形成情况。结果共培养4d后,心肌的自发搏动频率明显增高。荧光显微镜下观察发现存在空间位置上相邻的BMSCs和CM。Western blotting结果显示,hHCN4+BMSC与CM共培养组Cx43表达明显高于hHCN4-BMSCs与CM共培养组。透射电镜观察显示,hHCN4+BMSCs可与相邻细胞形成指状交错的连接。结论 hHCN4基因修饰的大鼠BMSCs可与CM建立有效的电机械连接,其自发起搏功能更接近CM,为进一步进行生物起搏治疗提供了实验依据。
[Abstract]:Objective to co-culture rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) modified by supercyclic nucleotide gated cationic channel 4 (hHCN4) gene with neonatal cardiomyocytes (CM), and to observe their cellular connectivity and pacemaker function. Methods CM was isolated from neonatal rat and labeled with hHCN4-BMSCs. The labeled CM was co-cultured with BMSCshHCN4 BMSCs and hHCN4-BMSCs, respectively. After 4 days of co-culture, the spontaneous pulsatile frequency of each group was detected, the spatial position of the two groups of cells was observed under fluorescence microscope, the expression of gap junction protein 43 (Cx43) was detected by Western blotting, and the formation of gap junction between cells was observed by transmission electron microscope. Results after co-culture for 4 days, the spontaneous pulsatile frequency of myocardium increased significantly. The results of BMSCs and CM.Western blotting showed that the Cx43 expression of hHCN4 BMSC and CM co-cultured group was significantly higher than that of hHCN4-BMSCs and CM co-culture group. Transmission electron microscopy showed that hHCN4 BMSCs could intersect with adjacent cells. Conclusion hHCN4 gene modified rat BMSCs can establish an effective electromechanical connection with CM, and its spontaneous pacing function is closer to that of CM, which provides experimental basis for further biological pacing therapy.
【作者单位】： 辽宁医学院附属第一医院心内科;
【基金】：辽宁省科学技术计划项目(2012225019)~~
【分类号】：R329

【参考文献】

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