豚鼠心肌组织Cav1.2钙通道蛋白的提取与纯化

发布时间：2018-08-12 12:46

【摘要】：目的探寻从豚鼠心肌组织中提取纯化全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白的实验方法。方法采用组织匀浆、超高速离心的方法获得溶解状态的Cav1.2钙通道蛋白,使用亲和层析的方法对钙通道蛋白进行进一步的纯化,再应用Western blot技术使用不同的Cav1.2钙通道抗体对所制备的心肌Cav1.2钙通道蛋白进行鉴定。结果比较CHAPS和Triton X-100的增溶效果,发现去污剂CHAPS能够更好地促进钙通道蛋白的溶解,且浓度为2%CHAPS是能够使钙通道蛋白溶解且不损害钙通道结构的最适浓度;同时,蛋白电泳和免疫印迹结果显示,提取制备所得的蛋白为心肌Cav1.2钙通道蛋白。结论亲和层析方法提取了纯度较高的全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白,为系统研究心肌Cav1.2钙通道奠定了坚实的基础。
[Abstract]:Objective to explore the method of extracting and purifying Cav1.2 calcium channel protein from guinea pig myocardium. Methods the soluble Cav1.2 calcium channel protein was obtained by tissue homogenate and ultrahigh speed centrifugation. The calcium channel protein was further purified by affinity chromatography. Different Cav1.2 calcium channel antibodies were used to identify the prepared cardiac Cav1.2 calcium channel protein by Western blot technique. Results by comparing the solubilization effect of CHAPS and Triton X-100, it was found that CHAPS could promote the dissolution of calcium channel protein better, and the concentration of 2%CHAPS was the optimum concentration for dissolving calcium channel protein without damaging the structure of calcium channel. The results of electrophoresis and Western blotting showed that the extracted protein was cardiac Cav1.2 calcium channel protein. Conclusion the high purity Cav1.2 calcium channel protein was extracted by affinity chromatography, which laid a solid foundation for systematic study of myocardial Cav1.2 calcium channel.
【作者单位】： 中国医科大学药学院药物毒理学教研室;鹿儿岛大学医学部;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No 31071004,30870907,81100108)
【分类号】：R363

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 吴辉;李立环;陈雷;黄爱杰;;心肌肽素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响[J];中国药理学通报;2006年05期

2 刘妍妍;白云龙;王涛;杜娟;张妍;李宝馨;吕延杰;杨宝峰;;白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响[J];中国药理学通报;2007年02期

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 赵玉杰;刘玉波;曾峥;;心肌缺血-再灌注损伤的药物防治[J];中国全科医学;2007年18期

2 张洁;张振贤;张烨;;中医药辨治良性心律失常进展[J];上海中医药大学学报;2011年04期

3 郭雪红;;白藜芦醇的制备及药理作用概述[J];天津药学;2008年03期

4 孙宇;胡慧媛;郝丽英;;心肌L型钙通道钙依赖性调节研究新进展[J];生理科学进展;2013年05期

5 郭赞;杨晶;徐鹏;高璐;袁芳;张翼;;虎杖苷抑制麻醉大鼠颈动脉窦压力感受器反射的研究[J];现代中西医结合杂志;2011年13期

6 王桂英;张丽男;冯敬坤;岳华;李乾;宋翠淼;王娜;;白藜芦醇对动物离体心房收缩力和心率作用的种属差异性比较[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年29期

7 王宝;刘建勋;;中药对心肌细胞钙离子通道作用的研究与展望[J];中国中医药信息杂志;2009年05期

8 王桂英;张丽男;李乾;冯敬坤;;钾通道参与白藜芦醇对不同动物离体心房的负性变时作用[J];中国药理学通报;2007年07期

9 张婉;潘振伟;冯铁明;吕延杰;董德利;杨宝峰;;苦参碱对缺血性心室肌细胞快速延迟整流钾电流的作用[J];中国药理学通报;2008年03期

10 吴红;金秀东;白云龙;关立新;吕延杰;杨宝峰;;高胆固醇血症致大鼠心室肌细胞L-型钙电流失衡的机制[J];中国药理学通报;2008年03期

相关硕士学位论文 前3条

1 何少平;柴胡三参胶囊对心肌缺血心律失常模型大鼠心肌细胞Ca~（2+）及SERCA2a表达的影响[D];湖南中医药大学;2010年

2 王宝;丹酚酸A干预心肌缺血再灌注损伤的钙相关机制研究[D];中国中医科学院;2010年

3 曹明;甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响[D];南昌大学;2010年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前8条

1 徐岩,陈旭华,王腾,高世明;藻酸双酯钠对豚鼠心室肌细胞动作电位及L-型钙电流的影响[J];中国药理学通报;2002年05期

2 杨宝峰,单宏丽,周宇宏,龚冬梅,董德利,杜智敏;一种筛选抗心律失常药物新模型的建立[J];中国药理学通报;2003年02期

3 张广钦,郝雪梅,陈世忠,周培爱,程和平,吴才宏;芍药苷对大鼠心肌细胞L钙通道的阻断作用[J];中国药理学通报;2003年08期

4 王赫,周宇宏,单宏丽,陈庆文,张妍,杨宝峰;冬虫夏草水提液对单个心室肌细胞钾通道的影响[J];中国药理学通报;2004年05期

5 刘玉梅,周宇宏,单宏丽,冯铁明,乔国芬,杨宝峰;延胡索乙素对豚鼠单个心室肌细胞钾离子通道的影响[J];中国药理学通报;2005年05期

6 孔祥平,万华印,李茹冰,王丽华,吴燕,李婉,王晓良;心肌肽素抗心律失常作用及对钙和钾离子通道的影响[J];中国病理生理杂志;2000年02期

7 吴辉,李立环,陈雷,黄爱杰,史世勇,丁陆陆;心肌肽素对豚鼠心室肌细胞内向整流钾电流的影响[J];中国分子心脏病学杂志;2005年02期

8 刘恭鑫,顾全堡,郭棋,杨英珍;大鼠、豚鼠心肌细胞的简单、快速分离[J];中国应用生理学杂志;1997年04期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 尚德秋,李兰玉;应用RBC-酵母花环试验检测布鲁氏菌感染或免疫机体的RBC免疫功能的观察[J];中国人兽共患病杂志;1987年03期

2 李秉正;邓立军;于秀华;高俊峰;赵雅媛;赵燕妮;;感染华支睾吸虫豚鼠的胆管病变超微结构研究[J];中国医科大学学报;1987年02期

3 顾克显;;DNCB反复应用于致敏豚鼠耳：一个有效的新的人接触性湿疹动物模型的初步特征[J];国际皮肤性病学杂志;1993年05期

4 吴光明，彭裕文，于彦铮;豚鼠心脏CGRP－IR神经纤维与终末的超微结构定位[J];神经解剖学杂志;1994年02期

5 林健，曹平;过敏性鼻炎豚鼠模型复制的初步报告[J];中国实验动物学杂志;1994年03期

6 刘顺利，高下，黄维国，王锦玲，邱建华;ATP对正常豚鼠内耳毛细胞钙调素免疫反应的影响[J];第四军医大学学报;1996年02期

7 王东关,刘执玉,毕玉顺;豚鼠肠系膜淋巴管平滑肌细胞的培养[J];微循环学杂志;2001年01期

8 吴凤云,鲁立新,胡静珠,丁冬琴;药物实验中动物创面包扎方法的改进[J];中华烧伤杂志;2004年02期

9 唐泰山,郭爱珍,陆承平,许冬青;细菌DNA可显著增强豚鼠接种猪链球菌溶血素的免疫效果[J];中国免疫学杂志;2004年07期

10 王淑静;畜用布氏菌S_(105)活菌苗的研究与应用[J];中国媒介生物学及控制杂志;2005年03期

相关会议论文 前10条

1 李淑荣;赵玉珍;张连巍;雷建章;;透射电镜对豚鼠内耳螺旋器毛细胞的研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

2 倪斌;沈振亚;;胸腺修饰和全身照射预处理受体对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

3 刘昀;康志敏;周建;蒋春雷;;快速灌流固定豚鼠肺组织石蜡制片探讨[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年

4 王郡甫;张建华;张捷;冯进波;孙内;许晓群;田志刚;;重组人白细胞介素-6的制备及对辐射豚鼠血小板低下的治疗作用[A];第八届全国中西医结合肿瘤学术会议论文集[C];2000年

5 张灵霞;吴雪琼;史迎昌;梁建琴;张俊仙;;几种结核分支杆菌重组蛋白诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究[A];中国防痨协会全国学术会议大会学术报告[C];2001年

6 孙红梅;许红;吴海霞;白丽敏;魏北星;李曦;;EAE豚鼠脊髓较大血管损伤的形态学观察[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

7 隋梅花;李继承;;豚鼠卵巢囊淋巴孔的发现及激素调控[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

8 张冬梅;;豚鼠用于药物被动皮肤过敏试验的评价[A];2010年全国药物毒理学学术会议论文集[C];2010年

9 赵文婧;李琴;寇亚丽;吴卓;陈维平;;体外模拟微环境诱导骨髓间充质干细胞向心肌组织样结构分化的初步研究[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

10 郑义;龚辉;李凡成;;变应性鼻炎豚鼠造模综述[A];世界中联耳鼻喉口腔专业委员会换届大会及第三次学术年会暨中华中医药学会耳鼻喉科分会第十七次学术交流会暨广东省中医及中西医结合学会耳鼻喉科学术交流会论文汇编[C];2011年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 毛黎;科学家成功利用光亮控制蛋白活性[N];科技日报;2008年

2 梅进;改良植物基因研制抗艾滋蛋白[N];大众卫生报;2009年

3 刘霞;科学家发现天然抗流感蛋白[N];科技日报;2009年

4 常丽君;新技术可找到干细胞分化的关键蛋白[N];科技日报;2011年

5 庄愉;新型抗结核疫苗的开发研究[N];中国医药报;2002年

6 刘海英;与病毒相关的蛋白质研究获重大突破[N];科技日报;2010年

7 记者 胡德荣;一种蛋白分子能清除病原微生物[N];健康报;2010年

8 衣晓峰　许延庆;乳粘素在凝血中的作用机制被揭示[N];中国医药报;2009年

9 吴一福;细胞移植治疗心肌梗死研究新进展[N];中国医药报;2003年

10 ;有万能的流感疫苗吗?[N];上海科技报;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 焦绪栋;迟缓爱德华氏菌基因工程疫苗的构建及免疫效果的研究[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2010年

2 叶新民;豚鼠病毒感染性咳嗽模型的建立及其神经源性炎症机制探讨[D];广州医学院;2010年

3 孙启英;Tau+/clq-/-双转基因小鼠模型的建立及clq影响Tau蛋白磷酸化的研究[D];中南大学;2013年

4 朱蕾;快速老化模型小鼠增龄过程中脑蛋白质组学及差异点[D];中国协和医科大学;2009年

5 安输;两种节肢动物过敏原的分离纯化及结构与功能研究[D];中国科学技术大学;2012年

6 陈磊;新型结核病亚单位疫苗的制备和有效性评价及疫苗Ⅰ型过敏反应评价[D];山东大学;2010年

7 刘晓磊;ALCAT1介导心肌肥厚的病理进程及调控线粒体氧化应激和自噬的机制[D];中南大学;2012年

8 赵颖岚;L-ficolin抑制HCV感染及ApoE3介导HCV的免疫逃逸机制研究[D];武汉大学;2012年

9 刁明芳;谷氨酸—N-甲基-D-天冬氨酸—一氧化氮合酶—活性氧通路在声损伤中的作用研究[D];第二军医大学;2005年

10 李秋霞;有氧运动通过eNOS增强的线粒体功能改善老年大鼠心肌胰岛素抵抗[D];第四军医大学;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 冷静;三氯乙烯致敏豚鼠肾损伤及其氧化应激机制的研究[D];安徽医科大学;2011年

2 于连发;豚鼠房室结形态结构及胶原纤维的增龄性变化[D];山西医科大学;2002年

3 陈金烟;应用酵母双杂交系统初步筛选与SARS-CoV解旋酶相互作用的细胞蛋白[D];福建医科大学;2007年

4 覃焕桦;声诱发短潜伏期负电位（ASNR）的豚鼠模型[D];广西医科大学;2007年

5 黄长文;豚鼠不同部位肝外胆道组织缺血再灌注损伤的对比观察[D];江西医学院;2000年

6 董娜;结核疫苗评价用豚鼠I型过敏反应检测方法的建立[D];中国协和医科大学;2010年

7 马可;褪黑素对人脐血来源EPC作用及应用蛋白质芯片检测蛋白质表达差异研究[D];中国协和医科大学;2010年

8 霍丽曼;豚鼠糖尿病模型的建立和细胞外钾离子浓度对糖尿病豚鼠乳头肌动作电位的影响及其机制的研究[D];河北医科大学;2013年

9 贾辉辉;钙激活氯通道TMEM16A在小鼠心肌组织的表达[D];青岛大学;2012年

10 张琨;无菌豚鼠的培育及无菌豚鼠EV71比较医学研究[D];中国协和医科大学;2010年

，

本文编号：2179098