人ZP3的N端肽的体外表达

发布时间：2018-08-25 07:56

【摘要】：目的:为了深入研究透明带的功能,体外表达人ZP3的N端肽段。方法:通过PCR克隆人ZP3的第77~703的DNA序列,利用该片段构建hZP3的N端肽的原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行体外表达,利用分离的表达产物免疫小鼠,通过ELISA检测抗体反应,利用Western blotting和免疫组化检测抗血清与重组透明带蛋白和人卵巢天然的透明带蛋白的特异反应。结果:Western blotting结果显示,获得了约27 ku的重组蛋白,用该蛋白免疫小鼠获得了抗体滴度近20000的抗血清,该抗体能与重组透明带蛋白和人卵巢天然的透明带蛋白的特异反应。结论:成功表达人ZP3的N端重组肽,表达产物具有免疫原性。
[Abstract]:Aim: to study the function of pellucida in vitro and express the N-terminal peptide of human ZP3. Methods: the DNA sequence of human ZP3 77703 was cloned by PCR, and the prokaryotic expression vector of N-terminal peptide of hZP3 was constructed by using this fragment. The expression of Rosetta (DE3) was transformed into E. coli Rosetta in vitro. The mice were immunized with the isolated expression product, and the antibody reaction was detected by ELISA. The specific reaction of antiserum to recombinant pellucida protein and human ovarian natural pellucida protein was detected by Western blotting and immunohistochemistry. Results the results of Western blotting showed that the recombinant protein was about 27 ku, and the antibody titer was about 20000 in mice. The antibody could react with the recombinant pellucida protein and the natural pellucida protein of human ovary. Conclusion: the N-terminal recombinant peptide of human ZP3 is successfully expressed and the expressed product has immunogenicity.
【作者单位】： 暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系;
【基金】：国家自然科学基金重点项目(21307017)
【分类号】：R321

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2202259