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液相串联质谱法同时定量检测生物样本中鞘脂类化合物

发布时间:2019-04-17 12:11
【摘要】:鞘脂类中的主要活性分子鞘氨醇1-磷酸(S1P),可通过介导细胞增殖、分化和迁移等发挥广泛的生物学功能;同时,S1P可在相关酶的作用下转变为其它形式.本文旨在建立一种简便的鞘脂类的制备方法,并结合液相串联质谱(LC-MS/MS)快速检测生物样本中纳克水平的鞘脂类化合物.采用甲醇沉淀或经典的脂质提取方法获得鞘脂类化合物,再采用LC-MS/MS在多反应监测模式(MRM)下进行定量分析.实验结果表明,甲醇沉淀法可简便快捷地获得血浆或脂蛋白中鞘氨醇类化合物;S1P、二氢鞘氨醇(DH-S1P)和鞘氨醇(SPH)的定量限分别为110.5、215.6和44.3 pg;人血浆中S1P、DH-S1P和SPH的含量分别为257.8±49.4 nmol/L、93.5±17.3 nmol/L和44.6±7.4nmol/L,鞘脂类化合物在人血浆脂蛋白上的分布存在显著性差异;在ApoE-/-小鼠血浆中S1P、DHS1P和SPH的含量分别为590.1±78.2 nmol/L、197.8±60.6 nmol/L和35.4±16.7 nmol/L;每1×106个人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)中,S1P和SPH的含量分别为103.7±21.8 pg和16.3±5.3ng.甲醇沉淀法结合LC-MS/MS可简便快捷地对血浆和脂蛋白中的鞘脂类化合物进行定量检测.该方法特别适用于大量生物样本中鞘脂类的快速定量分析.
[Abstract]:Sphingosine-1-phosphate (S1P), a major active molecule in sphingomyelids, can play a wide range of biological functions by mediating cell proliferation, differentiation and migration, and S1P can be transformed into other forms under the action of related enzymes. The aim of this paper is to establish a simple method for the preparation of ensheathing lipids and to rapidly determine the nath-level sphingolipid compounds in biological samples by liquid phase tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Sphingolipid compounds were obtained by methanol precipitation or classical lipid extraction method. Then LC-MS/MS was used for quantitative analysis under the multi-reaction monitoring mode (MRM). The results showed that the quantitative limits of S1P, dihydrosphingosine (DH-S1P) and sphingosine (SPH) were 110.5215.6 and 44.3 pg;, respectively, and the quantitative limits of S1P, dihydrosphingosine (SPH) and sphingosine were 110.5215.6 and 44.3 pg;, respectively. The contents of S1P, DHS1P and SPH in human plasma were 257.8 卤49.4 nmol/L,93.5 卤17.3 nmol/L and 44.6 卤7.4 nmol / L, respectively. There was significant difference in the distribution of sphingolipids in human plasma lipoproteins. The contents of S1P, DHS1P and SPH in plasma of ApoE-/- mice were 590.1 卤78.2 nmol/L,197.8 卤60.6 nmol/L and 35.4 卤16.7 nmol/L;, respectively. The contents of S1P and SPH in 1 脳 10 6 human umbilical vein endothelial cells (EA.hy926) were 103.7 卤21.8 pg and 16.3 卤5.3 ng. Methanol precipitation combined with LC-MS/MS is a simple and rapid method for quantitative determination of sphingolipids in plasma and lipoprotein. This method is especially suitable for rapid quantitative analysis of scabbard lipids in a large number of biological samples.
【作者单位】: 山东省高校动脉粥样硬化重点实验室 泰山医学院动脉粥样硬化研究所;
【基金】:国家自然科学基金(No.30971098;No.81070247) 山东省泰山学者岗专项基金(No.ZD056;No.ZD057) 2012泰山医学院高层次课题培养计划项目(No.330033)~~
【分类号】:R341

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号:2459420

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