亲环素A启动单核细胞炎症性募集的机制

发布时间：2019-07-28 19:54

【摘要】：目的探讨亲环素A在单核细胞参与氧化应激炎症反应中的作用。方法人类单核细胞系THP-1细胞常规体外培养,以亲环素A作为氧化应激炎症反应的主要活性氧诱导刺激因子,Transwell法检测亲环素A对单核细胞迁移趋化的影响;ELISA检测单核细胞培养液中主要炎症反应因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量变化;明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性变化;Western blot检测核因子κB(NF-κB)炎症信号通路、丝裂原活化蛋白激醇(MAPK)炎症信号通路的激活。结果亲环素A可以诱导单核细胞迁移趋化,促进单核细胞分泌炎症反应因子IL-6;亲环素A通过MAPK-NF-κB炎症信号通路增强MMP-9活性。结论亲环素A诱导单核细胞迁移趋化,促进单核细胞分泌炎症因子,显示了其启动单核细胞炎症性募集的作用。
【图文】：

P-actin图4.CypA对IkBq：的表达影响（n=3)a为P<0.05，与0min时相比。Figure4.EffectsofCypAonI?BaproteinexpressioninTHP-1cells图1.CypA诱导单核细胞迁移趋化（四倍镜）A为空白组，，B为100pg/LCypA组，C为200jxg/LCypA组。Figure1.CypAinducedTHP-1migration2.2CypA对单核细胞MMP-9活性的影响THP-1细胞用200pg/LCypA刺激36h后，提取细胞培养上清液用明胶酶谱法检测MMP-9活性的变化。结果发现，单核细胞经CypA刺激36h后，MMP-9活性明显增强（图2)。250I 0图3.CypA对单核细胞分泌IL4和TNF-a的影响（n=5)a为P<0.05,与空白组比较。Figure3.EffectsofCypAonsecretionofIL-6andTNF-ainTHP-1cells2.4CypA对NF-kB信号通路的影响200(xg/LCypA刺激单核细胞，在不同时间段(0,30,60及120min)收集细胞,提取细胞总蛋白及细胞核蛋白，行Westernblot检测。结果发现，CypA在120min内可以逐渐激活NF-kB通路，即IKB磷酸化后迅速降解（图4),同时伴随p65的转核（图5)，在120min达到高峰。给予CypA活性抑制剂CsA预处理CypA后，这一作用结果消失（图6)，说明NF-kB通路的激活确实由CypA作用产生。3060120minPBS 空白组 CypA组图2.CypA对MMP-9活性的影响（n=3)a为P<0.05,与空白组比较。Figure2.EffectofCypAonMMP-9activity2.3CyPA对单核细胞IL>6和TNF-a表达的影响THP-1细胞用0.5%FBS-RPMI培养24h，再用200^g/LCypA刺激24h后,提取细胞培养上清液用ELISA检测IL>6,TNF-a表达的变化。结果发现,单核细胞经CypA刺激24hfsJL-6的表达明显增加，但对TNF-a的表达没有影响（图3)。10CN43-1262/R中国动脉硬化杂志2013年第21卷第9期 793-?

Figure3.EffectsofCypAonsecretionofIL-6andTNF-ainTHP-1cells2.4CypA对NF-kB信号通路的影响200(xg/LCypA刺激单核细胞，在不同时间段(0,30,60及120min)收集细胞,提取细胞总蛋白及细胞核蛋白，行Westernblot检测。结果发现，CypA在120min内可以逐渐激活NF-kB通路，即IKB磷酸化后迅速降解（图4),同时伴随p65的转核（图5)，在120min达到高峰。给予CypA活性抑制剂CsA预处理CypA后，这一作用结果消失（图6)，说明NF-kB通路的激活确实由CypA作用产生。3060120minPBS 空白组 CypA组图2.CypA对MMP-9活性的影响（n=3)a为P<0.05,与空白组比较。Figure2.EffectofCypAonMMP-9activity2.3CyPA对单核细胞IL>6和TNF-a表达的影响THP-1细胞用0.5%FBS-RPMI培养24h，再用200^g/LCypA刺激24h后,提取细胞培养上清液用ELISA检测IL>6,TNF-a表达的变化。结果发现,单核细胞经CypA刺激24hfsJL-6的表达明显增加，但对TNF-a的表达没有影响（图3)。10CN43-1262/R中国动脉硬化杂志2013年第21卷第9期 793-两聊■‘■①ctubljopO(％5!su①aido'pA组空白组(_i/6U)9—_iI(_J/6U)BIU_N1
【作者单位】： 江苏大学附属医院心内科;
【基金】：国家青年自然科学基金(81200222) 镇江市社会发展支撑项目(SH2011053)
【分类号】：R363

【参考文献】

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本文编号：2520305