铜绿假单胞菌中PA4857对Ⅲ型分泌系统调节机制的研究

发布时间：2019-12-06 06:31

【摘要】：铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种条件致病菌,能引起人体急性和慢性感染。急性感染主要与三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)和运动能力有关,而慢性感染主要与六型分泌系统(type Ⅵ secretion system,T6SS)和生物被膜有关。铜绿假单胞菌可以利用T3SS向宿主分泌毒性蛋白,逃避吞噬细胞的吞噬,引起宿主上皮细胞和巨噬细胞的损伤,破坏胞内信号或者导致细胞死亡。铜绿假单胞菌主要分泌4种毒性蛋白来发挥作用:包括胞外酶S(ExoS),胞外酶T(ExoT),胞外酶U(ExoU)以及胞外酶Y(ExoY)。目前,T3SS调控网络的研究并不清楚,还有很多未知的调控因子没有发现。本研究以铜绿假单胞菌的效应蛋白ExoS作为突破点,通过构建转座突变库筛选对exoS的表达有调控的基因。将exoS的启动子与lux报道子融合,整合至PAO1菌株中,并在此菌的基础上构建转座突变体库。根据发光强弱的变化,结果共筛选到15个影响exoS'表达的基因,包括已知的exsA,pcrD和vqsM等,以及几个未知功能的基因,如:PA5264,PA4857等。本文对PA4857进行了重点研究(根据PA4857功能将其命名为tspR)。在PAO1中敲除掉tspR基因(ΔtspR),发现效应蛋白ExoS、生物被膜的形成量以及细胞毒性均降低,突变体对小鼠的致病能力也有所影响。进一步的研究还发现tspR对调控RsmA的两个小RNA:RsmY和RsmZ,均有负调控作用。ExoS在两个双突变ΔtspRΔrsmY、ΔtspRΔrsmZ中的表达量以及生物被膜的形成量基本恢复到野生型水平。同时,在retS突变体中,T3SS的表达量和生物被膜的形成量可以通过过表达tspR而部分恢复到野生型水平。这说明RetS正调节tspR,而TspR通过调控两个小RNA(RsmY/RsmZ)来调控T3SS。因此,本研究发现了一个与retS-gacS系统相协调的新的调控途径:retS-tspR途径。这些研究结果为进一步理解T3SS这一复杂的调控网络提供了新的认识。
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R378

【参考文献】