ω-3多不饱和脂肪酸对急性结肠炎小鼠模型的干预研究及机制初探

发布时间：2020-03-26 13:40

【摘要】：研究背景炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)是一组病因尚未明确的慢性复发性肠道炎症性疾病,主要包含溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn' s disease,CD)。鱼油为一种富含ω-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFA)的油类,研究显示其对IBD有治疗作用,该治疗作用可能与肠道菌群相关,但该领域的研究相对较少。目的:探究ω-3 PUFAs对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导小鼠急性结肠炎的抑制作用及相关机制初探。方法:8周龄C57BL/6小鼠给予含2.5%DSS的饮水5天以建立急性结肠炎模型。小鼠分为对照组及DSS建模组,再细分为单纯对照组、鱼油对照组、益生菌(VSL#3)对照组、鱼油+VSL#3对照组、单纯建模(DSS)组、鱼油建模组、VSL#3建模组、鱼油+VSL#3建模组。自建模前2周至处死前分别给予鱼油定制饲料和/或溶有VSL#3饮用水干预。建模前每周收集小鼠粪便,建模后每日观察小鼠情况,测量小鼠体重,DSS干预结束后第2天处死小鼠,评估结肠长度及病理炎症评分,通过Western Blotting测定结肠组织Caspase-1、GasderminD、IL-1β表达及激活水平,通过16s rRNA测序测定小鼠肠道菌群结构。结果:DSS建模组小鼠死亡率、体重下降程度、结肠缩短程度、病理炎症评分均显著高于对照组。鱼油建模组、VSL#3建模组及鱼油+VSL#3建模组小鼠结肠炎症相比单纯建模组的体重下降程度、病理炎症评分显著减低,死亡率亦呈下降趋势,结肠长度无显著差异。鱼油建模组比VSL#3建模组病理评分显著减低,体重下降幅度有减小趋势。粪便16s rRNA分析显示,VSL#3对粪便菌群结构无显著影响,而鱼油可提高肠道菌群多样性,使Firmicutes丰度上升而Bacteroidetes下降。基于Western Blotting,DSS建模组比对照组,Caspase-1及IL-1 β无活化而GasderminD显著活化,鱼油建模组及鱼油+VSL#3建模组小鼠GasderminD活化程度显著低于单纯建模组,VSL#3建模组比单纯建模组GasderminD活化呈降低趋势,鱼油建模组比VSL#3建模组活化呈降低趋势。结论:鱼油可抑制DSS诱导的小鼠急性结肠炎,维持肠道菌群多样性并改变菌群结构,抑制GasderminD介导的细胞焦亡可能是其相关机制。
【图文】：

鱼油,模型,对照组,饮用水

于饮用水（ｌ0８ＣＦＵ／ｍｌ，每天制备后换新）进行干预。小鼠在ＤＳＳ建模前２周开逡逑始给予千预，持续至小鼠处死。对照组采用定制对照词料及普通饮用水。实验逡逑设计及分组见图２及表７逡逑逦鱼油／ＶＳＬ＃３饮食干预逦逡逑逦ＤＳＳ逦逡逑ＷＯ逦Ｗ１逦Ｗ２逦Ｄ５邋Ｄ７逡逑Ｉ逡逑急性炎症评估逡逑图２：邋ＤＳＳ诱导小鼠结肠炎模型及饮食干预逡逑逦表７：实验分组逦逡逑组别逦ｍ逦ｍＲ逦ｍ逦只数逡逑（１）单纯对照组逦Ｃ逦空白逦６逡逑对照逦（２）鱼油对照组逦Ｆ逦鱼油逦６逡逑组逦（３）ＶＳＬ＃３邋对照组逦Ｖ逦ＶＳＬ＃３逦６逡逑（４）

结肠,肛门,炎症,病理

结肠标本留取如图３所示。逡逑ＲＮＡ逦蛋白逡逑回盲部逦＾逦肛门逡逑逦病理逦逡逑图３：结肠标本留取不意图逡逑６小鼠结肠炎症评估逡逑６．１体重变化逡逑给予小鼠ＤＳＳ后第０－７天每天测定小鼠体重。逡逑６．２结肠长度逡逑将解剖出来的结肠固定于泡沫板上，，沿长轴轻轻拉直，用直尺测量回盲部逡逑至肛门端的长度逡逑６．３病理炎症评分逡逑根据Ｚｈａｏ等的方法邋＇邋请病理科医生按照表８对小鼠结肠病理ＨＥ切片进逡逑行炎症评分。每一评分按受累结肠组织的比例乘以系数（ＸＩ：邋０－２５％；邋Ｘ逡逑２：邋２６－５０％；邋Ｘ３：邋５１－７５％；邋Ｘ４：邋７６－１００％）。逡逑逦表８：病理炎症评分方法逦逡逑评分逦０逦
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R574.62;R-332

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