内质网应激蛋白在Cyp4a14基因敲除小鼠肠炎模型中的表达及意义

发布时间：2020-05-13 07:04

【摘要】：背景:炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种肠道的慢性非特异性炎症性疾病,其病因还未明确。内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)参与多种疾病的发病机制,包括IBD。Cyp4a14是一种肝脏产生的与脂质过氧化及氧化应激密切相关的酶。然而Cyp4a14基因对炎症性肠病ERS影响仍不清楚。目的:探究ERS相关蛋白在葡聚糖硫酸钠(dextra sulfate sodium,DSS)诱导的Cyp4a14基因敲除小鼠肠炎模型中的表达及意义。方法:选取6-8周龄,体重为19-25g,健康清洁级129S1/SvJ种系Cyp4a14基因敲除(knockout,KO)和野生型(wild type,WT)雄性小鼠,随机分为WT对照组、WT DSS组、KO对照组和KO DSS组,每组8只,4只每笼,并适应性喂养1周,确认小鼠健康且适应环境。对照组自由饮用双蒸水,DSS组则饮用3.0%DSS溶液。造模周期为6天,第6天造模结束后终止所有干预措施。通过体重变化情况、疾病活动指数评分(disease activity index,DAI)、结肠长度和HE染色等方法以及白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-αmRNA水平评估肠道炎症程度,采用实时定量PCR技术检测小鼠结肠组织内质网应激相关蛋白GRP78、IRE1α、XBP1u、XBP1s、IRE1β、PERK、ATF6和CHOP,及肝脏Cyp4a14 mRNA的表达水平,采用免疫组化及western blot法检测小鼠结肠组织GRP78、ATF6和CHOP蛋白的表达情况,采用western blot法检测小鼠肝脏Cyp4a14蛋白表达情况。结果:1.WT和KO对照组均无肠炎表现,而KO DSS组有轻度肠炎、WT DSS组有重度肠炎。WT和KO DSS组组织病理学评分及DAI评分与对照组相比均显著增高(均P0.05),且WT DSS组与KO DSS组相比升高更为明显(P0.05);WT DSS组结肠长度明显缩短(均P0.05);2.炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平在WT DSS组与KO DSS组表达明显升高(均P0.05),且IL-6和TNF-αmRNA在WT DSS组比KO DSS组升高更为显著(P0.05)。3.炎症组与对照组比较IRE1α、XBP1u和PERK mRNA表达无差异;IRE1βmRNA在WT和KO DSS组表达明显下调(均P0.05);XBP1s在WT DSS组与WT对照组相比表达降低(P0.05),而ATF6和CHOP mRNA表达升高(均P0.05),但KO DSS组与KO对照组相比无差异。4.Cyp4a14 mRNA及蛋白在WT DSS组肝脏表达明显下调(均P0.05)。5.WT DSS组GRP78、ATF6和CHOP mRNA及蛋白与WT对照组比较明显升高(均P0.05)。结论:1.Cyp4a14基因敲除小鼠可以抵抗DSS诱导的肠炎。2.Cyp4a14基因可能通过影响ATF6、CHOP和XBP1s mRNA的表达参与ERS的调控,从而在IBD的病理过程中发挥重要作用。3.GRP78-ATF6-CHOP通路在小鼠结肠炎模型中被激活,可能参与了IBD的发展过程。
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R574;R-332

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