hADSCs过表达hGH和hTβ4细胞系的构建及其生物学特性检测的实验研究

发布时间：2020-05-17 00:03

【摘要】：目的本研究旨在通过慢病毒转染的方法用人生长激素(Human growth hormone,hGH)和人胸腺素β4(Human Thymosin beta 4,hTβ4)基因真核过表达载体转染至人脂肪间充质干细胞(hADSCs),并检测其在hADSCs中的表达以及对其生物学特性的影响,为研究组织工程皮肤探索新的种子来源。方法收集我院手术病人废弃正常脂肪组织标本,分离培养原代hADSCs,进行细胞鉴定,并传代。慢病毒转染法制备hGH与hTβ4过表达hADSCs细胞系。病毒载体中携带嘌呤霉素(Puromysin)抗性基因,使用含Puromysin的培养基筛选感染后的细胞来以到稳转株。对转染后的细胞进行生物学特性检测,分别使用RT-PCR检测转染后的hADSCs在基因水平上的变化、Elisa和Weston-blot检测转染后的hADSCs在蛋白水平上的变化。结果经细胞表面标志物鉴定,hADSCs表面标志物CD90和CD44呈阳性表达,而CD34呈阴性。RT-PCR检测结果表明,转染hGH的hADSCs较未转染的hADSCs,hGH表达量提高1.78倍,转染hTβ4的hADSCs较未转染的hADSCs,hTβ4表达量提高1.65倍。Weston-Blot条带灰度分析数据显示过表达hGH的hADSCs hGH表达量高于hADSCs;过表达hTβ4的hADSCs hTβ4表达量高于hADSCs;过表达hGH的hADSCs和过表达hTβ4的hADSCs的ERK表达量高于hADSCs;过表达hGH的hADSCs和过表达hTβ4的hADSCs的p-ERK表达量高于hADSCs。Elisa结果显示hGH-hADSCs上清蛋白含量显著高于hADSCs上清蛋白(*P0.01);hGH-hADSCs胞浆蛋白含量显著高于hADSCs胞浆蛋白含量(**P0.01);hTβ4-hADSCs上清蛋白含量显著高于hADSCs上清蛋白含量(*P0.01);hTβ4-hADSCs胞浆蛋白含量显著高于hADSCs胞浆蛋白含量(**P0.01)。结论(1)慢病毒转染法可以成功构建hADSCs过表达hGH与hTβ4细胞系。(2)hADSCs过表达hGH与hTβ4细胞系较hADSCs细胞系的hGH与hTβ4表达量显著提高。
【图文】：

图 2.1 不同代数 hADSCs 的生长情况（A）原代 hADSCs；(B)第 4 代 hADSCs（100×）结果如图 2.1 所示：细胞密度均匀。原代 hADSCs 形态偏圆，旋涡状分布，第 4 代的 hADSCs态较细长，以梭型的为主。2.2 hADSCs 增殖能力的检测

（A）原代 hADSCs；(B)第 4 代 hADSCs（100×）结果如图 2.1 所示：细胞密度均匀。原代 hADSCs 形态偏圆，，旋涡状分布，第 4 代的 hADS形态较细长，以梭型的为主。2.2 hADSCs 增殖能力的检测
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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本文编号：2667570