酸性环境对人脐带间充质干细胞的影响

发布时间：2017-03-26 19:16

  本文关键词：酸性环境对人脐带间充质干细胞的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cell, MSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,因能分化为间质组织而得名,在特定的体内外环境下,能够诱导分化成为多种组织细胞。人脐带间充质干细胞(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell, HUMSCs)来源于新生儿脐带华通氏胶,取材方便,来源广泛、不受伦理限制、免疫原性低、体外增殖能力强等特点,因此,HUMSCs作为细胞治疗中的种子细胞成为近年来再生医学,细胞移植及癌症治疗的研究热点。研究表明在局部缺血和炎症环境中,如呼吸道过敏性哮喘、类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、肿瘤微环境等,由于低氧诱导发生无氧糖酵解,导致乳酸积累,进而引起胞外环境的酸化,不利于正常组织细胞生存。而HUMSCs作为种子细胞用于细胞治疗的机理尚未有相关报道,本研究选用HUMSCs为细胞模型,体外模拟病理性酸性环境,探讨酸性环境对HUMSCs的存活与迁移能力的影响,同时初步研究HUMSCs在酸性条件下的细胞应答机制。方法：采用“爬片”分离获得HUMSCs;流式细胞术检测HUMSCs的表面标记物；Real-time PC R检测HUMSCs中四种质子感知受体(TDAG8,GPR4, OGR1和G2A)的表达；Real-time PCR检测酸性条件刺激下HUMSCs中四种质子感知受体(TDAG8,GPR4,OGR1口G2A)的表达；MTT法检测HUMSCs在酸性条件下的存活能力；Micro Chemotaxis Chamber法检测HUMSCs在酸性条件下的迁移能力。结果：利用爬片法成功分离培养获得HUMSCs,流式细胞仪检测显示HUMSCs高表达CD105、CD90、CD73、CD29,低表达CD45、CD34 和 HLA-DR。 Real Time PCR检测发现HUMSCs细胞中GPR4受体的相对表达量显著高于其它几个受体(P口0.01)。其次是TDAG8和OGR1受体的表达量(TDAG8OGR1), G2A几乎不表达。Real Time PC R检测发现TDAG8在pH6.8时高表达；MTT法检测结果显示在pH6.8、pH7.2、pH7.6条件下,人脐带间充质干细胞的细胞存活率没有显著性；Micro Chemotaxis Chamber法检测pH6.8刺激HUMSCs促进细胞迁移。结论：在酸性环境中人脐带间充质干细胞高表达质子感知受体TDAG8,并且在酸性环境中,HUMSCs可以存活,即人脐带间充质干细胞能够适应酸性环境,同时酸性刺激促进HUMSCs迁移。该研究首次探讨了酸性环境对HUMSCs存活与转移的影响,为后续深入研究HUMSCs作为种子细胞用于细胞治疗机制提供了一定的基础理论研究。
【关键词】：人脐带间充质干细胞 酸性环境 质子感知受体 存活 迁移
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329
【目录】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-11
• 英文缩略词表11-12
• 一 前言12-14
• 二 材料与方法14-25
• 2.1 主要试剂及实验材料14
• 2.2 主要仪器设备14-15
• 2.3 常用溶液的配置15-16
• 2.4 人脐带间充质干细胞(HUMSCs)的分离培养16-18
• 2.4.1 人脐带间充质干细胞(HUMSCs)的分离16
• 2.4.2 人脐带间充质干细胞(HUMSCs)的传代16-17
• 2.4.3 人脐带间充质干细胞(HUMSCs)的冻存17-18
• 2.4.4 人脐带间充质干细胞(HUMSCs)的复苏18
• 2.5 人脐带间充质干细胞生物学特性鉴定18-23
• 2.5.1 人脐带间充质干细胞形态学的观察18
• 2.5.2 人脐带间充质干细胞标准曲线的制作18
• 2.5.3 人脐带间充质干细胞生长曲线的制作18-19
• 2.5.4 人脐带间充质干细胞表面标记物的鉴定19
• 2.5.5 人脐带间充质干细胞总RNA的提取19-20
• 2.5.6 总RNA中的基因DNA的去除20
• 2.5.7 人脐带间充质干细胞cDNA的获得20-21
• 2.5.8 Real Time PCR检测HUMSCs中四种质子感知受体mRNA的表达量21-23
• 2.6 MTT法检测人脐带间充质干细胞在酸性条件下的存活能力23
• 2.7 Micro Chemotaxis Chamber检测人脐带间充质干细胞在酸性条件下的迁移能力23-25
• 三 结果与分析25-32
• 3.1 人脐带间充质干细胞的分离培养及形态观察25-26
• 3.2 人脐带间充质干细胞标准曲线的绘制26
• 3.3 人脐带间充质干细胞生长曲线的绘制26-27
• 3.4 人脐带间充质干细胞表面标记物鉴定27-28
• 3.5 人脐带间充质干细胞中质子感知受体mRNA的表达28-30
• 3.6 不同pH刺激后细胞内质子感知受体mRNA的表达量30-31
• 3.7 人脐带间充质干细胞在酸性条件下的存活能力31
• 3.8 人脐带间充质干细胞在酸性条件下的迁移能力31-32
• 四 讨论32-33
• 五 结论33-34
• 文献综述34-39
• 参考文献39-45
• 致谢45

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6 刘晓丹;刘兵;李秀森;毛宁;;人脐带间充质干细胞的分离与培养[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

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10 洪珞珈;赵明明;张宇晶;;间充质干细胞与系统性红斑狼疮[A];2012年全国微循环与血液流变学基础研究及临床应用学术研讨会专题报告及论文集[C];2012年

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1 王敏;羊膜间充质干细胞克隆的分离和生物学特性的研究[D];华东理工大学;2010年

2 苏晓华;牛胎肝间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究[D];东北林业大学;2011年

3 邓长卿;脐带间充质干细胞生物学特性及功能研究[D];苏州大学;2011年

4 杨晨;脐带间充质干细胞的分离鉴定[D];吉林大学;2013年

5 马云鹏;应用大块平铺法对人脐带间充质干细胞分离、传代、冻存及复苏的研究[D];河北医科大学;2013年

6 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人脐带间充质干细胞凋亡及其分子机理[D];内蒙古大学;2013年

7 王黎明;脐带间充质干细胞的分泌蛋白表达谱研究[D];安徽医科大学;2014年

8 唐秋灵;人脐带间充质干细胞向男性生殖细胞分化的研究[D];汕头大学;2008年

9 徐小霞;人胎盘绒毛层间充质干细胞体外培养的优化及生物学特性的初步分析[D];苏州大学;2009年

10 王建军;成人脂肪间充质干细胞体外长期培养及成骨潜能的实验研究[D];兰州大学;2009年

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