IWR1维持人胚胎干细胞自我更新的分子机制研究
【图文】：
图１．２邋Ｃｔｎｎｂｉ敲低的ｈＥＳＣｓ能够维持未分化状态逡逑（Ａ）逦ｑＲＴ－ＰＣＲ分析在添加ＡｃｔｉｖｉｎＡ，邋ｂｌ＾ＧＦ和ＩＷＲ１的基础培养基中培养７ｗ＾／ｓｈＲＮＡｈＥＳＣｓ中ｈＥＳＣｓ多能性标志物（（９ｃ／？＾和」＼＾／７0尺）表达。相对于逡逑ｍｂｌｅ邋ｓｈＲＮＡ，邋＊＊ｐ邋＜０．０１。逡逑
ＱｗｊＷ邋ｋｏ邋ｈＥＳＣｓ在长期培养一段时间后，仍然保留了典型的未分化ＥＳＣ逡逑形态，并且经过免疫荧光染色（ＩＦ）后，多能性基因ＯＣ７Ｖ表达染色呈阳性（图逡逑１．３Ｃ），此结果，与敲低的细胞株结果类似（图１．２Ａ和Ｂ）。总之，这些逡逑结果表明敲除的ｈＥＳＣｓ能够维持未分化状态。逡逑Ａ逦Ｂ逡逑Ｃｔｎｎｂｌ邋ＣＤＳ邋ｆｒｏｍ邋６１邋ｔｏ邋７８ｂｐ逦ｃｔｎｎｂｉ邋ｗｔ邋ｋｏ逡逑Ｗｉｌｄ邋Ｔｙｐｅ：邋ＣＴ邋ＧＴＴＡＧ邋ＴＣＡＣＴ邋ＧＧＣＡＧＣ逦ＣＴＮＮＢ１逡逑Ｋｎｏｃ＾ＣＴＧＴＴＡＧ＾ＣＡＣＴＧＧＣＡＧＣ逦0侧一寿逡逑Ｃ逦ＣＴＮＮＢ１１邋０ＣＴ４邋Ｈｏｅｃｈｓｔ邋ＣＴＮＮＢＩ／Ｈｏｅｃｈｓｔ逡逑｜~|媝■曑逡逑画■■■■逡逑图１．３邋Ｃｔｎｎｂｌ敲除的ｈＥＳＣｓ能够维持未分化状态逡逑（Ａ邋，邋Ｂ邋）通过ＨＥＳ２邋ＥＳＣ中的基因组ＤＮＡ测序和蛋白质印迹分析验证逡逑ＣＲ１ＳＰＲ／Ｃａｓ９对Ｃ融Ｗ的敲除。逡逑（Ｃ）在邋ｍＴｅＳＲ邋中培养邋１０邋代的邋Ｃ／ｗｊＷ－？Ｍ／／ｈＥＳＣｓ邋中的邋ＣＴＡＷ５／邋和邋ＯＣ７Ｖ邋的免逡逑疫染色。ＰＢ：邋ＰｉｇｇｙＢａｃ，邋ＣＶｗ？Ａ／：邋ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ，邋ＷＴ：野生型。数据代表三个生物逡逑重复的平均值±ｓ．ｄ。比例尺，，１００ｐｍ。逡逑３．２逦需要其转录活性来诱导ｈＥＳＣｓ分化逡逑３．２．１邋ＣＹ＂／}?／突变体过表达的ｈＥＳＣｓ细胞株的建立逡逑为了验证是否通过其转录活性诱导ｈＥＳＣｓ分化，基于’基逡逑因的特定结构域，设计了一系列的缺失突变体｜５，６１邋（图２．１Ａ）。７８１个氨基酸组逡逑成的Ｃ／Ｗ７／）／蛋白是重要的转录反式激活因子［７］。基于此
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R321
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本文编号：2701734
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