MicroRNA-101对急性心肌梗死模型血管新生的影响及其相关机制研究
发布时间：2020-06-08 14:26
【摘要】：目的心肌梗死的修复过程与梗死区内是否有血管迅速生成或残留的血管是否重新开放密切相关,心肌梗死后快速建立良好的侧支循环来改善梗死区血液供应,促进梗死区心肌的存活具有非常重要的意义。探讨miR-101对急性心肌梗死模型血管新生的影响及其相应的调控机制。方法(1)采用miRNA qRT-PCR检测在模拟缺氧条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中mi R-101的表达量变化。(2)分别用EdU实验、划痕实验、小管形成实验检测miR-101对HUVECs细胞增殖、迁移和血管新生能力的影响。(3)采用mi Randa、miRMap等12个生物信息学软件预测miR-101的靶基因及与真核细胞翻译起始因子4E3(eukaryotic translation initiation factor 4E,EIF4E3)3’端非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)的结合位点。(4)双荧光素酶报告基因实验检测miR-101与EIF4E3 3’-UTR的直接结合并抑制EIF4E3表达的能力。(5)Western blot检测内皮细胞转染mi R-101 agomi R-101,antagomiR-101,scrambled RNA及EIF4E3 siRNA后,检测EIF4E3及EIF4E1、HIF-1α、VEGF-A的表达。(6)在心肌梗死C57BL/6小鼠模型体内注射纯化的Adv-miR-101干扰及空载体腺病毒,免疫荧光染色检测心肌血管内皮细胞增殖情况(CD31/Ki67)和血管密度(CD31/α-SMA),并用M型超声检测小鼠心功能变化。结果(1)在CoCl_2诱导的缺氧状态下,内皮细胞中miR-101表达在5d内较未缺氧时增高(p0.05)。(2)缺氧状态下,agomiR-101组与antagomiR-101组和scrambled RNA组相比可显著促进内皮细胞增殖、迁移和网状结构形成(p0.05)。(3)生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因检测证实了mi R-101可靶向结合EIF4E3 3’-UTR并抑制其表达(p0.05)。(4)采用siRNA干扰EIF4E3表达,Western Blot检测HIF-1α和VEGF-A表达量较对照组显著上调(p0.05)。分别用agomiR-101、antagomiR-101和scrambled RNA干预HUVECs生长,agomiR-101组较antagomi R-101组和scrambled RNA组EIF4E3表达量显著下降,HIF-1α和VEGF-A表达量较对照组显著上调(p0.05)。(5)用Adv-miR-101干预C57BL/6小鼠心肌梗死模型,Adv-miR-101能促进了血管内皮细胞增殖,增加心肌血管密度,从而改善心功能(p0.05)。结论MiR-101可通过抑制EIF4E3表达,促进HIF-1α和VEGF-A表达,调节内皮细胞增殖、迁移和血管新生,这可能为缺血性心脏病的治疗提供一种新方法。
【图文】：
实验仅一个变量时采用单因素方差分析，两个及多个变量时采用多因素方差分析，两组间比较采用双侧不配对 t 检验。当 p 小于 0.05 时，说明差异具有统计学意义。结果1 EdU 检测各组细胞增殖能力使用 EdU 试剂盒标记 agomir-101 组、antagomir-101 组及 scrambledRNA 组增殖 48h 的 HUVECs 进行标记。用荧光显微镜采集图像结果（图 1.1），绿色的细胞核为 EdU 染色，蓝色的细胞核为 Hochest 染色，细胞核被染为绿色的细胞为正在增殖的 HUVECs。观察发现，，scrambled RNA 组 HUVECs 被绿色标记的细胞数较少；agomir-101组与scrambledRNA组相比，被EdU标记细胞数显著增加（p<0.05），antagomir-101 组与 scrambled RNA 组相比，被 EdU 标记细胞数显著降低，差异具有统计学意义（p<0.05）（图 1.2）。
图 1.2 EdU 实验检测 miR-101 对 HUVECs 增殖状况的影响 1.2 The effect on proliferation rate of HUVECs after miR-101 transfecdetected by EdU Incorporation Assay.*, p < 0.05; **, p < 0.01验条件下，分别将 agomiR-101，antagomiR-101，scrambled R中，于 48h 后 EdU 实验检测细胞修复能力（图 1.3），与 scr较，agomiR-101 促进了 HUVECs 迁移能力（p<0.01），而 ant复能力有轻度抑制作用，具有统计学意义（p<0.05）。（图 1
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R542.22;R-332
本文编号：2703217
【图文】：
实验仅一个变量时采用单因素方差分析，两个及多个变量时采用多因素方差分析，两组间比较采用双侧不配对 t 检验。当 p 小于 0.05 时，说明差异具有统计学意义。结果1 EdU 检测各组细胞增殖能力使用 EdU 试剂盒标记 agomir-101 组、antagomir-101 组及 scrambledRNA 组增殖 48h 的 HUVECs 进行标记。用荧光显微镜采集图像结果（图 1.1），绿色的细胞核为 EdU 染色，蓝色的细胞核为 Hochest 染色，细胞核被染为绿色的细胞为正在增殖的 HUVECs。观察发现，，scrambled RNA 组 HUVECs 被绿色标记的细胞数较少；agomir-101组与scrambledRNA组相比，被EdU标记细胞数显著增加（p<0.05），antagomir-101 组与 scrambled RNA 组相比，被 EdU 标记细胞数显著降低，差异具有统计学意义（p<0.05）（图 1.2）。
图 1.2 EdU 实验检测 miR-101 对 HUVECs 增殖状况的影响 1.2 The effect on proliferation rate of HUVECs after miR-101 transfecdetected by EdU Incorporation Assay.*, p < 0.05; **, p < 0.01验条件下，分别将 agomiR-101，antagomiR-101，scrambled R中，于 48h 后 EdU 实验检测细胞修复能力（图 1.3），与 scr较，agomiR-101 促进了 HUVECs 迁移能力（p<0.01），而 ant复能力有轻度抑制作用，具有统计学意义（p<0.05）。（图 1
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R542.22;R-332
【参考文献】
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1 金鑫;陈玉成;刘伟强;王浩宇;王斌;曾智;;雌激素促大鼠急性心肌梗死后心肌血管生成及受体介导机制[J];四川大学学报(医学版);2008年03期
本文编号：2703217
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