新型大鼠尿路感染模型的建立与中药方剂对产ESBLs大肠埃希菌致大鼠复杂性尿路感染作用的研究

发布时间：2020-06-10 09:44

【摘要】：第一部分 经尿道留置膀胱异物加注射产ESBLs大肠埃希菌建立尿路感染大鼠模型目的:探究采用经尿道留置膀胱异物加注射ESBLs大肠埃希菌的方法建立尿路感染大鼠模型的可行性。方法:30只雌性SD大鼠随机分为空白组,无异物7d、14d组,异物7d、14d组,每组6只。异物组经尿道置入异物加注射ESBLs大肠埃希菌菌液,无异物和空白组分别注入等量菌液和无菌生理盐水。流式细胞学检测外周血白细胞及中性粒数,尿液行细菌培养计数及耐药鉴定,肾脏HE染色。结果:异物7d、14d组尿液细菌阳性率为100%;无异物7d组尿液细菌阳性率为33.3%,无异物14d组尿液培养无细菌;异物7d组肾脏HE病理可见明显炎性变化,异物14d组肾小球周围可见少许纤维组织;无异物7d组尿液细菌培养阳性的大鼠肾脏可见有少许的炎症细胞浸润,无异物14d组肾脏未见明显炎症变化;异物7d、14d组中性粒细胞百分率较无异物组和空白组均增高(P0.05);异物7d组白细胞数较无异物7d组和空白组增高(P0.05)。结论:经尿道留置膀胱异物加注射ESBLS大肠埃希菌可建立高成功率、稳定的尿路感染大鼠模型。第二部分 中药方剂对产ESBLs大肠埃希菌致大鼠复杂性尿路感染的作用目的:探究中药方剂对产ESBLs大肠埃希菌所致复杂性尿路感染的作用及其可能机制,为临床中药治疗ESBLs大肠埃希菌复杂性尿路感染提供实验基础。方法:66只雌性SD大鼠随机分为空白组5只、阿莫西林克拉维酸钾组5只、模型组8只、左氧氟沙星组8只、八正散组8只、左氧氟沙星+扶正清热通淋组8只、八正散(前7d)+扶正清热通淋组(后7d)8只、扶正清热通淋(低、高剂量)组各8只;空白组注入无菌生理盐水,其余各组经尿道置入异物后注射等量产ESBLs大肠埃希菌菌液;治疗2周后处死取材,流式细胞学检测外周血白细胞数及中性粒百分比(NEUT%),尿素酶-谷氨酸脱氢酶酶法检测外周血尿素氮(BUN)的浓度,肌氨酸氧化酶法检测外周血肌酐(CREA)的浓度,ELISA法检测外周血C反应蛋白(CRP)、CD4+、CD8+及尿液SIg A、NAG分子的浓度,尿液行细菌培养,肾脏HE染色。结果:NEUT%和CRP:空白组、各治疗组(左氧氟沙星组除外)明显低于模型组(P0.05);尿液细菌培养阳性率:空白组、阿莫西林克拉维酸钾组、左氧氟沙星+扶正清热通淋组、左氧氟沙星组阳性率分别为0、0、40%、80%,余各组阳性率均为100%,其细菌计数明显低于模型组;BUN:空白组及各治疗组均低于模型组;CREA:空白组和各治疗组均低于模型组(左氧氟沙星组除外);尿SIg A:阿莫西林克拉维酸钾组、左氧氟沙星+扶正清热通淋组、八正散组、扶正清热通淋组低剂量组均高于模型组,其中八正散+扶正清热通淋组明显增高(P0.05);尿NAG:空白组及各治疗组(左氧氟沙星除外)均低于模型组(P0.05);血清CD4分子:空白组和各治疗组均低于模型组,其中空白组、阿莫西林克拉维酸钾组、八正散+扶正清热通淋组、扶正清热通淋高剂量组、左氧氟沙星+扶正清热通淋组较明显(P0.05),与空白组比较,阿莫西林克拉维酸钾和八正散+扶正清热通淋组较空白组稍高,但无统计学意义(P0.05),余各组较空白组升高(P0.05);血清CD8分子:空白组和各治疗组均高于模型组,其中空白组、阿莫西林克拉维酸钾组、八正散+扶正清热通淋组、扶正清热通淋低高剂量组、左氧氟沙星+扶正清热通淋组明显高于模型组(P0.05),与空白组比较,阿莫西林克拉维酸钾和八正散+扶正清热通淋组较空白组稍低,但无统计学意义(P0.05),余各组较模型组降低(P0.05);肾脏HE病理:模型组肾脏可见大量炎症细胞,少许纤维组织增生,大量集合管上皮细胞坏死、脱落、细胞管形成。左氧氟沙星组较模型组未见明显好转。左氧氟沙星+扶正清热通淋组肾脏局部近端小管腔扩张,未见明显炎症。扶正清热通淋低剂量组肾脏可见较多炎症细胞,少许集合管坏死、脱落、管型形成。八正散组、八正散+扶正清热通淋组、扶正清热通淋高剂量组局部可见少许炎症细胞,局部近端小管腔扩张,上皮细胞扁平。空白组和阿莫西林克拉维酸钾组未见明显异常。结论:1、中药方剂能减轻大鼠复杂性尿路感染的全身和局部炎症;2、中药方剂可能有调节复杂性尿路感染大鼠免疫功能及保护肾功能的作用;3、中药方剂可能逆转细菌耐药而让不敏感抗生素重新对耐药细菌起有效治疗作用。
【图文】：

西 南 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文插管内流出；第三步：自制螺旋形导管沿插管官腔螺旋进入 1-2 圈（长度约 1.5cm）后用导丝推入膀胱（见图 1-1f、g），可见清凉尿液自插管官腔流出，留置异物成功（见图 1-1h）；然后，缓慢依次拔除导管及插管。最后，无菌操作将直径 1mm 导管插入各组大鼠膀胱，无异物和异物组用 1ml无菌注射器针头插入导管腔内缓慢注入约1.5X108CFU/ml产ESBLs大肠埃希菌菌液约 0.5ml，空白组注入等量的无菌生理盐水；迅速拔除导管同时用镊子夹闭尿道防止菌液溢出，细线结扎尿道口，2h 后松开，，恢复正常饮食。

图 1- 1 镜下观察肾脏病理改变（HE×100）注：a：空白组； b：无异物 7d 组；c：无异物 14d 组；d：异物 7d 组；e：异物 14d 组；讨 论可用于尿路感染模型的动物包括小鼠、大鼠、兔、狗、猪等。其中，大鼠个体适中，操作方便，可以从尿道或直接腹腔内注射细菌或置入异物，由于泌尿道解剖特点，易发生尿液自发性输尿管膀胱反流，注射细菌同时加夹闭尿道口的方法制作成机械性的膀胱内静水压增高，来造成逆行性感染，因而更适用于尿路感染动物模型制备[20]。但既往的造模方式，尿路感染的成功率较低，且与临床真实的感染途径和类型差异较大。本模型模拟临床常见的结石、异物滞留（支架管、尿管等）等原因导致的复杂性尿路
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R691.3;R-332

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本文编号：2706122