核因子κB（NF-κB）信号通路与朊病毒病关系的研究

发布时间：2020-06-20 01:50

【摘要】：核因子κB(NF-κB)通过调节其靶基因的转录,发挥多重生物学功能,不仅参与生理机能调节,同时参与多种疾病病理过程的调节,包括神经退行性疾病。然而,NF-κB信号通路在朊病毒病发病机理中的作用仍不十分明确。本研究首先评估了感染朊病毒的细胞系SMB-S15中NF-κB(p65)的状态。与正常对照细胞系SMB-PS相比,在SMB-S15细胞中p65和磷酸化形式的p65(p-p65)水平较低。在SMB-S15细胞中,NF-κB信号通路对肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激的反应较缓慢。清除SMB-S15细胞中PrPSc的复制,可在一定程度上恢复NF-κB的表达及活性。然而,在SMB-S15细胞中过表达p65并不影响PrPsc的复制。此外,在SMB-S15细胞的裂解物感染小鼠及朊病毒毒株263K感染仓鼠终末期的脑组织中p65水平显着下降。通过免疫荧光方法检测发现,来自正常或朊病毒感染的动物脑组织切片中,p65与神经元标志蛋白NeuN阳性细胞存在共定位,而与星形胶质细胞标志蛋白GFAP阳性细胞几乎无共定位现象。对可调节NF-κB活性的相关蛋白检测,结果显示,SMB-S15细胞和朊病毒感染的动物脑组织中的胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)含量均减少。这些数据表明在体外和体内朊病毒感染期间,经典NF-κB信号通路呈显著抑制状态。NF-κB(p65)的异常改变与细胞中PrPSc的复制和积累密切相关。小胶质细胞激活是朊病毒病的病理特征之一,常伴随着大量炎性因子的产生,如TNF-α、白介素6(IL-6)等。TNF-α不仅参与促炎症反应,还参与细胞通讯、分化及死亡等过程。本研究初步探索了 TNF-α对阮病毒病发生发展的影响。脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞系BV2条件培养基更易造成SMB-S15细胞的损伤。该条件培养基中,细胞因子TNF-α含量明显升高。此外,细胞因子TNF-α单独作用于SMB-S15细胞同样可导致其细胞活力的降低。然而,在TNF-α刺激后的SMB-S15细胞中,凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)及受体相互作用蛋白-1(RIP1)的剪切形式并无明显增加,且含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-8(caspase-8)活性明显低于SMB-PS细胞。相反,在TNF-α刺激后的SMB-S15细胞中,坏死性凋亡相关蛋白,即磷酸化的混合谱系激酶结构域(p-MLKL)含量明显增加。结果表明,TNF-α刺激所引起的SMB-S15细胞活性下降主要源于坏死性凋亡途径的激活。同时,清除SMB-S15细胞中PrPSc的复制后,细胞对TNF-α的耐受性得到了一定的提高。进一步表明,坏死性凋亡的发生与细胞中PrPsc的复制和积累密切相关。朊病毒感染所引起的经典NF-κB信号通路的显著抑制,一定程度上增加了炎性因子对朊病毒感染细胞的损伤作用,从而加速了疾病的发生发展过程。
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R373
【图文】：

变异体,脑病,羊痒病,疯牛病

Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｖａｒｉａｎｔｓ邋ｏｆ邋ＰＲＮＰ逡逑动物中发现的ＴＳＥ主要包括羊痒病（Ｓｃｒａｐｉｅ）、疯牛病（Ｂｏｖｉｎｅ邋Ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ逡逑Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｉｅｓ，ＢＳＥ）、马骤和麋鹿的慢性消耗性疾病（Ｃｈｒｏｎｉｃ邋Ｗａｓｔｉｎｇ邋Ｄｉｓｅａｓｅ，逡逑ＣＷＤ）、可传播性豹脑病（Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ邋Ｍｉｎｋ邋Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ，邋ＴＭＥ）、猫的海逡逑绵状脑病（Ｆｅｌｉｎｅ邋Ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ邋Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ，ＦＳＥ）等［３］（表邋１．１邋）0逡逑

病毒病,抗性,朊病毒病,氧乙烯

图１．３朊病毒病致病机制［１８］逡逑Ｆｉｇ．邋１．３邋Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ邋ｏｆ邋ｐｒｉｏｎ邋ｄｉｓｅａｓｅ逡逑病毒具有一定的蛋白酶抗性，其对于外界灭活的抵抗能力很强，对煮沸、逡逑、乙醇、双氧水、氋锰酸钾、碘、氧乙烯蒸汽、去垢剂、有机溶剂、甲醛、逡逑线、Ｙ射线和标准的１２１°Ｃ高压灭菌均有抗性，但可被强碱溶液灭活［２（）］。逡逑５逡逑

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