角膜混浊小鼠模型获得及其分子基础研究

发布时间：2017-03-29 10:09

  本文关键词：角膜混浊小鼠模型获得及其分子基础研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：乙烷基亚硝基脲(ENU)是一种人工合成的高效基因诱变剂,通过ENU诱导小鼠可获得大量的人类疾病动物模型,用于研究相关疾病的发生、发展机制以及对突变基因的功能研究。本文通过ENU诱变技术获得一例角膜混浊小鼠模型,并对其突变基因进行成功定位与鉴定,现汇报如下：1、ENU诱变获得一例角膜混浊小鼠模型ENU腹腔注射40只雄性C57BL/6J(B6)小鼠,待其恢复生殖能力后与同品系雌鼠配种,并对其后代进行筛选,获得多趾、小眼、短尾、瞳孔散大、角膜混浊等异常表型小鼠。本文以其中一例角膜混浊小鼠为研究对象,将该小鼠与正常B6小鼠配种,观察并记录63只后代,其中15只小鼠具有角膜混浊表型。组织学分析角膜混浊小鼠眼球发现,突变小鼠角膜基质层可见明显的新生血管,成纤维细胞明显增多,角膜上皮出现明显的角质层且通透性增加。2、角膜混浊小鼠突变基因的定位将B6背景角膜混浊小鼠与DBA(D2)小鼠配种获得F1代小鼠,再将F1代小鼠继续回交野生型B6小鼠获得[(B6×D2)F1×xB6]N2代小鼠。筛选F1突变杂合子所生N2代小鼠612只,其中26只小鼠携带角膜混浊表型。突变基因连锁分析结果显示,突变基因与微卫星D12Mit285连锁(LOD值3.78),初步将该基因定位于12号染色体上。在此基础上继续选择可用的微卫星对该突变基因进行精确定位,最终将该突变基因定位于12号染色体9.04cM之内。3、角膜混浊小鼠突变基因的鉴定通过对突变基因定位区域内逐个基因功能的分析,发现与眼球发育相关4个候选基因：mycn、adam17、sdc1、osr1,故分别PCR或RT-PCR扩增候选目的基因,切胶回收后测序,将以上测序结果与本中心野生型B6小鼠基因序列进行对比,筛查突变位点。序列比对结果显示在mycn基因编码区1217bp处发生T到C的转换,导致MYCN蛋白编码区第406位氨基酸发生由V(缬氨酸)到A(丙氨酸)突变,该突变位于MYCN蛋白螺旋-环-螺旋结构域(bHLH)。结论：本文获得一例角膜病小鼠模型,为相关疾病的研究提供动物模型。首次发现mycn基因突变可引起小鼠角膜混浊表型,但其机制不明,深入研究将丰富对mycn基因生物学功能的了解。
【关键词】：ENU 角膜混浊 基因定位 Mycn基因 人类疾病动物模型
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R772.2;R-332
【目录】：

• 论文摘要3-5
• Abstract5-8
• 符号说明8-9
• 第一部分 文献综述9-23
• 第一章 ENU诱变技术研究进展9-16
• 1 ENU诱变的机理9-10
• 2 ENU诱变筛查方法10-11
• 3 国内外ENU诱变研究进展11-13
• 4 参考文献13-16
• 第二章 角膜混浊及相关基因16-23
• 1 眼球的构造及角膜16
• 2 角膜混浊的原因16-18
• 3 角膜混浊相关基因18-19
• 4 参考文献19-23
• 第二部分 实验研究23-53
• 第三章 ENU诱变获得一例角膜混浊小鼠模型23-32
• 1 材料与方法23-26
• 2 结果26-28
• 3 讨论28-29
• 4 参考文献29-32
• 第四章 角膜混浊小鼠突变基因的定位32-42
• 1 材料与方法32-34
• 2 结果34-39
• 3 讨论39-40
• 4 参考文献40-42
• 第五章 角膜混浊小鼠突变基因的鉴定42-53
• 1 材料与方法42-45
• 2 结果45-49
• 3 讨论49-51
• 4 参考文献51-53
• 致谢53-54
• 攻读学位期间发表的学术论文目录54-55

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本文编号：274210