人胚胎二倍体细胞株Walvax-2的建立、检定及应用

发布时间：2020-08-17 14:35

【摘要】：人胚肺二倍体细胞是病毒性疫苗生产的重要宿主细胞之一,20世纪60年代至今,使用人胚肺二倍体细胞制备的疫苗在世界各地使用,如脊髓灰质炎病毒疫苗、风疹病毒疫苗、麻疹病毒疫苗、腮腺炎病毒疫苗、水痘病毒疫苗及甲肝病毒疫苗等。长期使用证明人胚肺二倍体细胞生产的疫苗是安全有效的,成为WHO推荐的病毒疫苗生产最安全的细胞。目前全球应用较多的是MRC-5和WI-38人二倍体细胞,虽然有很多企业及团体在开展人二倍体细胞的研究,但由于严格的伦理审查、复杂的遗传背景资料调查,使新型人胚肺二倍体细胞的研制缓慢。同时,人胚肺二倍体细胞有限的生命周期及有限使用代次的特性,使得人胚肺二倍体细胞资源弥足珍贵。现在使用的WI-38和MRC-5的供应逐渐减少,在我国使用较多的MRC-5,也存在生产细胞代次高及外部环境两个限制因素。因此,新的人胚肺二倍体细胞的研制已迫在眉睫。国内自建的KMB-17和2BS人二倍体细胞仅在自建单位及少数单位使用,由于体制原因,难以获得两株的细胞的使用权。基于人胚肺二倍体细胞基质的优越性和资源的珍贵性,本研究于2008年至今开展了全新的人胚胎二倍体细胞株的研制,成功筛选到一株合格的人胚肺二倍体细胞,命名为Walvax-2细胞株。该细胞株来源于3月龄流产女婴的肺部组织,经无菌分离及传代培养建立了冷冻保存的完整的三级细胞库,三级细胞库经细胞鉴别试验、无菌检查、支原体检查、细胞内、外源病毒因子检查、逆转录病毒检查、人源、牛源和猪源病毒等全面检定,质量合格,未检出各类微生物污染,且成瘤性检查结果为阴性,未发现结瘤驮,是一株优质细胞株。Walvax-2细胞株经用于多种病毒的适应性研究,以MRC-5细胞作为对照,开展了狂犬病毒株(CTN-1V株/PV-2061株)、水痘病毒株(Oka株)、甲肝病毒株(YN5株)的传代适应工作。结果显示,两株狂犬病毒在Walvax-2细胞上病毒滴度均获得有效增长,狂犬病毒CTN-1V株从第1代病毒滴度为4.84 log FFU/ml,传至第10代上升到8.141ogFFU/ml。狂犬病毒PV-2061株第1代病毒滴度为4.44 log FFU/ml,传至第10代达到8.02 log FFU/ml,而对照MRC-5细胞适应的病毒滴度表现为：CTN-1V株传至第10代为7.41 log FFU/ml, PV-2061株传至第10代为7.11 log FFU/ml。相同代次病毒滴度比较,Walvax-2细胞获得的病毒滴度均高于MRC-5细胞,Walvax-2和MRC-5细胞适应情况有明显的差异(P0.05)； Oka株(使用时毒株为32代)在Walvax-2细胞上进行病毒传代,病毒滴度平均值第1次传代就达到6.28 log PFU/ml,至Oka株传到41代时,最高病毒滴度达到6.66 log PFU/ml,而在MRC-5细胞上传代,最高滴度小于6.0 log PFU/ml。总体适应情况有显著差异(P0.05)； YN5株(使用时毒株代次为23代)在Walvax-2细胞上进行病毒传代,病毒滴度第1次传代达到7.32 logCCID50/ml,连续传代至31代,病毒滴度上升至7.65 log CCID50/ml。在Walvax-2细胞上总体情况较MRC-5细胞7.0-7.36 log CCID50/ml较高。实验结果表明3种病毒均对Walvax-2人胚肺二倍体细胞株表现了良好的适应性,适应性病毒培养后滴度均高于MRC-5细胞,且有统计学差异。Walvax-2作为一株新的人胚肺二倍体细胞株,对病毒有较好易感性,有希望成为现用二倍体细胞的替代者。
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R321;Q813

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