全饥饿对脑皮质细胞凋亡及相关因子表达的影响

发布时间：2017-04-03 01:15

  本文关键词：全饥饿对脑皮质细胞凋亡及相关因子表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究全饥饿状态对大脑皮层细胞凋亡及其相关因子Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达影响。方法成年雄性SD大鼠,健康清洁级90只,350±30g,随机分为6组(每组15只):正常对照组(即正常进食组),饥饿组为五组即3d组、5d组、7d组、9d组、11d组。其后又将每一组随机分为三个亚组I、II、III组,每一个亚组5只。其中每一组I组应用苏木素-伊红染色法观测大脑皮质区神经细胞的形态变化,采用TUNEL法检测凋亡细胞,然后利用图像分析仪来计算凋亡细胞表达数和凋亡指数,以此推测全饥饿状态下大脑功能的变化。II组大鼠皮质区Bcl-2、Bax、Caspase-3三种因子表达的信使核糖核酸及蛋白,其表达情况利用逆转录PCR技术和免疫印迹试验来检测观察,以研究急性全饥饿对大鼠脑皮质区凋亡相关因子的影响。III组大鼠在不同饥饿时限时脑组织含水量变化利用干湿重比法来检测观察,以便我们了解在这种情况下脑组织是否存在脱水情况。结果1大鼠一般行为观察饥饿3d和饥饿5d组大鼠的一般状态良好,饥饿后期即饥饿7d、9d、11d组,大鼠的一般状况极度变差,精神状态较萎靡,对刺激反应迟钝。2大鼠重量的变化饥饿前,各组大鼠之间对其机体重量进行两两对比,均无统计学差异(P0.05)。随着饥饿时间的增加,大鼠的体重不断减轻。3皮质区HE染色形态学比较结果光镜下(×400)组织形态观察可见:正常对照组、饥饿3d组和饥饿5d组大鼠皮质区的细胞清晰饱满,形态完整,分布紧密规则,细胞质染色深,分布均匀,细胞核居中,有明显大量的神经纤维。随着饥饿时间的延长,饥饿7d、9d、11d组大鼠皮质区细胞排列极其稀疏紊乱,细胞线不清,细胞间隙增宽,间质水肿疏松,神经细胞丢失、细胞结构不清,尼氏体减少,细胞质染色淡,细胞坏死增多。4皮质区细胞凋亡的检测结果与正常对照组相比,皮质区凋亡细胞百分率,饥饿3d组无显著差异(P0.05);饥饿5d组稍有增加,差异有统计学意义(P0.05);而饥饿后期7d、9d、11d组凋亡细胞百分比增加有显著差异(P0.01)。说明在饥饿早期,即饥饿3d时,大鼠皮质区神经细胞凋亡较少,饥饿5d组略有增加,而在饥饿后期,即饥饿7d、9d、11d时,大鼠皮质区凋亡细胞的数目明显增多。5逆转录PCR技术检测大脑皮质区在全饥饿状态下,三种凋亡相关因子其m RNA的表达结果与实验正常对照组相比,饥饿3d组Bax、Caspase-3 m RNA表达无明显增高(P0.05),而饥饿5d、7d、9d、11d组Baxm RNA、Caspase-3 m RNA表达均显著增加(P0.01);饥饿3d、5d、7d组Bcl-2m RNA的表达均增高(P0.05),5d组表达量最高(P0.01),9d、11d组表达降低(P0.05),11d组表达量最低(P0.01)。6免疫印迹试验检测大脑皮质区在全饥饿状态下,三种凋亡相关因子其蛋白的表达结果与对照组相比,饥饿3d组Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达无增加(P0.05),饥饿5d组Caspase-3蛋白表达增加(P0.05),Bax蛋白表达明显增多(P0.01),饥饿后期组7d、9d、11d组Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达均显著增加(P0.01),差异有统计学意义;饥饿3d、5d、7d组Bcl-2蛋白的表达均明显增高(P0.01),5d组表达量最高,9d、11d组表达降低,11d组表达量最低(P0.01)。7干湿比重法各饥饿组的脑组织含水量与正常对照组相比,3d组增加不明显(P0.05),5d组明显增加(P0.01),饥饿后期(7d、9d、11d)组均下降(P0.01)。结论1全饥饿状态下大鼠皮质区神经细胞凋亡增加从饥饿第5d开始存在。2在全饥饿状态下,短期饥饿应激可能有一定的脑保护作用,而长期饥饿应激引起大量皮质细胞凋亡,导致脑功能受损,应积极的预防和治疗。3在全饥饿状态下,Bcl-2、Bax、Caspase-3因子在凋亡调控中起着非常重要的作用。
【关键词】：全饥饿状态 大脑皮质 凋亡 Bcl-2 Bax Caspase-3
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338.25
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 实验研究13-47
• 1.1 材料与方法13-27
• 1.1.1 主要试剂13
• 1.1.2 主要实验仪器13-14
• 1.1.3 实验动物的选择14
• 1.1.4 实验大鼠分组14-15
• 1.1.5 全饥饿大鼠模型的复制15
• 1.1.6 标本的采集、处理及HE染色15-17
• 1.1.7 皮质区凋亡神经细胞的检测17-19
• 1.1.8 RT-PCR法检测皮质区Bcl-2、Bax、Caspase-3 三种因子mRNA的表达情况19-21
• 1.1.9 Western blot方法检测皮质区Bcl-2、Bax、Caspase-3 三种因子蛋白的表达情况21-26
• 1.1.10 干湿比重法26-27
• 1.1.11 统计学分析27
• 1.2 结果27-36
• 1.2.1 大鼠一般行为观察及体重变化27-28
• 1.2.2 皮质区HE染色形态学比较结果28-30
• 1.2.3 各组大鼠皮质区神经细胞凋亡情况30-32
• 1.2.4 大脑皮质区在全饥饿状态下Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达结果32-34
• 1.2.5 大脑皮质区在全饥饿状态下Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达结果34-36
• 1.2.6 大鼠脑组织含水量的变化36
• 1.3 讨论36-42
• 1.3.1 全饥饿大鼠动物模型的制备37
• 1.3.2 全饥饿状态对大鼠一般状况及体重的影响37-38
• 1.3.3 全饥饿状态对大鼠皮质区神经细胞凋亡的影响38-39
• 1.3.4 全饥饿状态下Bcl-2、Bax、Caspase-3 三种因子在皮质凋亡中的调控作用39-42
• 1.3.5 全饥饿状态对大鼠脑组织重量的影响42
• 1.4 小结42
• 参考文献42-47
• 第2章 综述47-62
• 2.1 凋亡概述47-48
• 2.2 细胞凋亡信号传导途径48-49
• 2.2.1 死亡受体信号通路48
• 2.2.2 线粒体途径48-49
• 2.2.3 内质网通路49
• 2.3 Bcl-2 蛋白家族与细胞凋亡49-52
• 2.3.1 Bcl-2 蛋白家族的分类、结构与功能49-51
• 2.3.2 Bcl-2 蛋白家族在细胞凋亡中的调控机制51-52
• 2.4 Caspase蛋白与细胞凋亡52-53
• 2.4.1 Caspase蛋白家族的分类、结构与功能52-53
• 2.4.2 Caspase-3 在细胞凋亡中的作用机制53
• 2.5 Bcl-2、Bax、Caspase-3 三者在细胞凋亡中的相互作用关系53-55
• 2.5.1 Bcl-2、Bax蛋白间的相互作用关系53-54
• 2.5.2 Bcl-2、Bax蛋白表达能够作为Caspase-3 的上游调控因素54-55
• 2.5.3 Caspase-3 亦能够作为bcl-2 的上游调控因素55
• 2.6 小结55
• 参考文献55-62
• 结论62-63
• 致谢63-64
• 导师简介64-65
• 作者简介65-66
• 学位论文数据集66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 方敏,王晓东;细胞凋亡的线粒体通路[J];北京大学学报(医学版);2002年01期

2 谢静涛,唐晋;饥饿状态对注意力的影响[J];湖南中医学院学报;2004年03期

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本文编号：283481