n-3脂肪酸对氧化应激诱导的细胞凋亡的作用及其分子机制

发布时间：2017-04-03 09:13

  本文关键词：n-3脂肪酸对氧化应激诱导的细胞凋亡的作用及其分子机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本课题利用SH-SY5Y细胞作为模型研究n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)对氧化应激诱导的细胞凋亡的作用及相关分子机制。研究采用终浓度为60μmol的n-3 PUFAs预处理细胞24小时后,再以终浓度为500μM的过氧化氢处理细胞一定时间。用Hoechst染色检测细胞凋亡、用Western blot和RT-PCR方法研究线粒体凋亡通路中Bcl-2家族蛋白的表达、MAPK抗凋亡信号通路中相关蛋白的表达、Nrf-2-ARE抗氧化应激通中下游目的基因HO-1的表达。用相应试剂盒检测线粒体膜电位(MMP)的丧失、活性氧(ROS)的生成。研究结果表明,经过500μM过氧化氢处理24h后,SH-SY5Y细胞发生严重的细胞凋亡,60μmol n-3 PUFAs预处理能显著抑制这种凋亡现象。对细胞凋亡信号通路的Bcl-2家族相关蛋白表达的研究发现,n-3 PUFAs预处理的细胞能够显著降低过氧化氢引起的促凋亡蛋白Bax、Bak表达增加;抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低的现象。过氧化氢刺激导致细胞正常MMP丧失、细胞内ROS水平显著上升,而n-3 PUFAs预处理的细胞能维持正常MMP,保护细胞免受氧化应激下的线粒体损伤和显著抑制ROS水平的升高。MAPK抗凋亡信号通路中相关蛋白的表达研究发现,n-3 PUFAs预处理的细胞能够显著降低过氧化氢引起的细胞内Erk蛋白磷酸化水平上升,缓解细胞抵御氧化应激压力,而对p38的磷酸化调控作用不显著。在对HO-1基因表达研究中,RT-PCR结果显示细胞内该基因在过氧化氢刺激下无显著变化,而n-3 PUFAs预处理在12 h内各个时间点对其表达也无显著调控作用。综上所述,n-3 PUFAs可以抑制过氧化氢诱导细胞凋亡现象,通过调节Bcl-2家族和MAPK信号通路的相关蛋白对凋亡起调控作用,该过程可能无HO-1的参与。此外,n-3 PUFA可以降低细胞内ROS水平、维持细胞正常MMP保护细胞线粒体功能。
【关键词】：n-3 PUFAs 氧化应激 细胞凋亡 Bcl-2 MAPK ROS
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第1章 绪论8-19
• 1.1 课题来源8
• 1.2 课题研究背景及国内外研究现状分析8-17
• 1.2.1 氧化应激8-10
• 1.2.2 细胞凋亡10-12
• 1.2.3 Nrf2-ARE抗氧化应激通路12-15
• 1.2.4 n-3 多不饱和脂肪酸（n-3 PUFAs）15-17
• 1.3 课题研究的目的和意义17-18
• 1.4 课题研究的主要方法和内容18-19
• 1.4.1 课题研究的主要方法18
• 1.4.2 课题研究的主要内容18-19
• 第2章 材料与方法19-28
• 2.1 研究材料19
• 2.2 研究主要仪器与试剂19-21
• 2.3 研究方法21-28
• 2.3.1 细胞培养与传代21-22
• 2.3.2 药物处理22
• 2.3.3 Hoechst染色22-23
• 2.3.4 线粒体膜电位（MMP）检测23
• 2.3.5 Ros水平检测23-24
• 2.3.6 Western blot24-25
• 2.3.7 RT-PCR25-27
• 2.3.8 数据处理27-28
• 第3章 N-3 PUFAs对过氧化氢诱导的细胞凋亡的影响28-35
• 3.1 引言28
• 3.2 HOECHST染色28-30
• 3.3 BCL-2 家族相关蛋白表达30-31
• 3.4 线粒体膜电位（MMP）检测31-33
• 3.5 讨论33-34
• 3.6 本章小结34-35
• 第4章 N-3 PUFAs对过氧化氢诱导的氧化应激及相关细胞信号通路的影响35-43
• 4.1 引言35
• 4.2 细胞内ROS水平检测35-37
• 4.3 MAPK信号途径相关蛋白磷酸化水平37-39
• 4.4 NRF2 下游HO-1 基因表达水平39-40
• 4.4.1 HO-1 基因表达检测39
• 4.4.2 EPA对HO-1 表达的影响（时间点实验）39-40
• 4.5 讨论40-41
• 4.6 本章小结41-43
• 结论43-44
• 参考文献44-60
• 攻读学位期间发表的学术论文及其它成果60-62
• 致谢62

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