卡波肉瘤相关疱疹病毒细胞抗原片的制备

发布时间：2020-10-16 12:24

　　 目的成功制备了卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的细胞抗原片,并验证其有效性,为检测KSHV血清标本提供了一种可行的办法。方法培养了能够稳定表达卡波肉瘤相关疱疹病毒核相关抗原(LANA)的BCBL-1细胞。BCBL-1细胞是感染过KSHV并且细胞基因组中包含KSHV基因的细胞。待细胞生长活力旺盛且状态良好时,收集细胞并用4%的多聚甲醛固定到预先处理好的抗原片上,完成封闭、待测血清的孵育和荧光二抗的孵育后,通过免疫荧光显微镜观察检测结果。结果通过免疫荧光技术发现,感染过KSHV的患者血清样本能观察到荧光标记的二抗激发的荧光,而未感染过KSHV的标本则没有观察到荧光标记的二抗激发的荧光。结论成功制备了能用于检测血清的卡波肉瘤相关疱疹病毒的细胞抗原片,为进一步研究卡波肉瘤相关疱疹病毒的流行病学提供方法。
【部分图文】：

图2 荧光显微镜下观察KSHV阳性与阴性样本检测结果 ×100目前常用于检测KSHV的血清学方法为ELISA间接法,用此方法检测血清有以下几个优点:① 适用于大量样本的检测,一块反应板至少可以检测90余份血清标本,一次检测数块反应板可完成上百个样本的检测;② 成本较低,ELISA中各种试剂、耗材及仪器价格相对较低,储存方便。但是缺点也是十分明显的:① 费时,包被抗原需4 ℃过夜,第2天检测血清样本时,当中各种过程所需的时间至少要6 h;② 检测过程中温度求高,在检测样本时,除洗涤外,所有的过程均需要在37 ℃的环境中进行,尤其是在酶和底物反应时,温度对最终的OD值影响较大;③ 洗涤不完全时,容易造成背景值的偏高,进而造成假阳性。采用细胞抗原片的方法检测血清样本也有优点:① 检测时间短,抗原片还可以储存。制作抗原片只需要1 h,检测样本需要3 h,制作完成的抗原片可置于-80 ℃保存,待有样本检测时可直接取出使用。② 灵敏度较ELISA法高,只有与阳性标本中的抗体结合的荧光二抗能激发目的荧光,目的荧光的强弱只与激发光的强弱相关,不受温度等因素的影响。但是此种方法也存在不足:① 细胞生长缓慢,BCBL-1细胞为悬浮细胞,相对于普通的贴壁细胞生长周期更长。② 要求避光。因为荧光二抗中的荧光物质在白光环境下容易淬灭,所以孵育二抗和在荧光显微镜下观察结果时不可过长时间暴露在白光下,进而造成假阴性。③ 费用相对较高,荧光显微镜的成本及维护和酶标仪表相比较高,不适用于临床检测样本。

BCBL-1细胞培养和12孔免疫荧光原位杂交载玻片

表1 合肥市238例普通人群KSHV的感染情况 性别 数量(例) 阳性数 感染率(%) 男 148 9 6.1 女 90 9 10.0 合计 238 18 7.6图3 KSHV阳性标本结果局部放大与细胞核染色对比
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本文编号：2843252