西尼罗病毒的逆转录重组酶介导扩增检测方法

发布时间：2020-10-21 10:37

　　 【背景】随着西尼罗热在全球范围内广泛流行,西尼罗热传入我国的风险加大。研究西尼罗病毒的快速检测方法,为西尼罗病毒检测建立方法储备。【目的】建立西尼罗病毒逆转录重组酶介导扩增(reverse transcription recombinase aided amplification,RT-RAA)检测方法。【方法】根据西尼罗病毒基因保守区序列设计引物和探针,建立西尼罗病毒RT-RAA检测方法,并评价该方法的重复性、特异性和灵敏度。【结果】RT-RAA方法的整个扩增反应过程温度恒定,反应温度为39°C,检测时间较短(20 min内),并且检测限可达10 copies,与基孔肯雅病毒、登革病毒、乙型脑炎病毒、黄热病毒等蚊媒病毒无交叉反应,具有良好的特异性,样本检测符合预期。【结论】建立的西尼罗病毒RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,可用于西尼罗病毒的口岸快速检测和流行病学监测。
【部分图文】：

西尼罗病毒RT-RAA重复性试验

CAP提供的西尼罗病毒灭活样本(20例出入境体检阴性血清样本和14例入境口岸发热人员血清样本)采用本研究建立的西尼罗病毒RT-RAA检测方法进行检测，检测结果见图4。可见CAP提供的样本可用本方法扩增，检测结果为阳性；20例出入境体检血清样本均为阴性，符合实验预期；14例入境口岸发热人员血清样本检测结果也为阴性。3 讨论与结论

配制好3管相同浓度(1.0×105 copies/μL)的西尼罗病毒质粒DNA和1管阴性对照放入恒温核酸扩增检测仪中进行检测，检测结果如图3所示。结果显示扩增反应起峰时间一致，曲线形态接近，具有良好的重复性。图2 西尼罗病毒RT-RAA敏感性试验
【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2850015