一种有效敲低原代B细胞中目的基因表达以快速鉴定基因功能方法的建立

发布时间：2020-10-25 04:45

　　 B细胞介导的抗病毒体液免疫应答过程涉及大量基因的上调表达,为快速鉴定这些基因的功能,需在体外建立一种有效敲低B细胞中目的基因表达以研究基因功能的方法,但目前已有的方法转导效率较低且很少将B细胞转移到小鼠体内以观察其增殖和分化。本研究首先将Drosha酶特异性小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)与反转录病毒包装质粒共转染至病毒包装细胞中,大大提高了病毒的滴度;其次,在培养基中加入抗CD180抗体,构建了原代B细胞的体外培养体系,使B细胞在保持自身特性的同时具有较强的增殖能力;再次,增加离心感染(spin infection)次数,进一步提高了B细胞的转导效率;另外,通过小鼠预先感染,可收获更多增殖、分化的B细胞以供表型分析。通过上述改进措施,成功敲除了B细胞功能基因Bcl6的表达,验证了其抗凋亡功能。该方法的建立为研究病毒急、慢性感染中B细胞的增殖、分化与缺陷机制奠定了良好基础。
【部分图文】：

与原代T细胞相比，B细胞在体外很难被病毒有效转导。T细胞在体外单次离心感染即可获得30%以上的感染效率[8]，而原代B细胞单次感染效率非常低。本研究尝试重复离心感染以提高B细胞的感染效率，结果发现重复离心感染使B细胞转导效率在共转Drosha酶特异性siRNA的基础上约增加1倍，即从现有的5%～15%提高到30%以上（图3）。图2 反转录病毒包装载体共转染Drosha酶特异性siRNA对B细胞转导效率的影响

反转录病毒包装载体共转染Drosha酶特异性siRNA对B细胞转导效率的影响

B细胞1次和2次感染后的转导效率
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本文编号：2855481