单次大剂量X射线照射建立小鼠放射性口腔黏膜炎模型的实验研究

发布时间：2020-10-27 06:34

　　目的建立单次大剂量X射线照射的小鼠放射性口腔黏膜炎模型。方法采用X射线单次照射小鼠头颈部的造模方式,将SPF级C57BL/6J小鼠55只,随机分为正常对照组,15、16、17和18 Gy照射组,每组11只,其中8只用于观察照后30 d存活和体质量变化,另外3只于照后9 d活杀,取舌组织进行甲苯胺蓝染色、HE染色和Ki67免疫组化标记,根据舌黏膜损伤程度确定最佳照射剂量。结果 15和16 Gy照射组小鼠30 d存活率分别为87.5%和12.5%,17、18 Gy照射组小鼠在11 d内全部死亡,照后9 d为最佳取材时间。15～18 Gy照射组小鼠口腔黏膜甲苯胺蓝染色均可见阳性着色,HE染色和Ki67免疫组化结果提示经X射线一次性头颈部照射剂量17 Gy,能显著减少小鼠舌尖和舌背的上皮厚度以及上皮增殖细胞数量。结论 C57小鼠经17 Gy一次性头颈部照射,可用于放射性口腔黏膜炎模型的相关研究。
【部分图文】：

体质量,X射线,剂量,舌尖

腔?掀は赴?（舌尖、舌背）和非角化上皮细胞（舌腹）等结构正常。X射线照射后，舌尖和舌背的角化上皮结构紊乱，基底层排列不连续，其下出现大量炎性细胞浸润，毛细血管扩张充血，上皮厚度变薄（图3A）。在上皮厚度方面，以舌尖部分最敏感，15~18Gy照射组舌尖黏膜厚度明显变薄，与正常组相比均有显著差异（P<0.001）。舌背的黏膜层在15Gy照射剂量下表现为黏膜增生，上皮厚度较正常组略微增加，但差异无统计学意义；16Gy照射时，角化上皮结构崩解，但上皮厚度与正常组相比差异无统计学意义图1不同剂量X射线局部照射对C57小鼠体质量和存活的影响A.对照组及15、16、17、18Gy照射组小鼠30d体质量变化曲线；B.各组小鼠30d生存曲线189

舌体,头颈,射线,黏膜

??攵哉兆橄啾炔?异有统计学意义（P<0.001）（图1B）。根据小鼠最低体质量时间和中位生存时间的结果，确定15~18Gy照射后第9天为可行的取材时间。22.2不同剂量X线照射后小鼠舌体大体观察正常小鼠舌体黏膜呈粉红色、质嫩，甲苯胺蓝染液无着色。经X射线照射后，照射组小鼠舌黏膜下充血，舌背溃疡面产生，甚至出现水泡。甲苯胺蓝染色后病损区着色阳性。15、16GyX射线照射后，肉眼可见散在点状破损，随着照射剂量增加至17和18Gy，舌背出现成片溃疡，舌体颜色变深（图2）。图2X射线头颈部照射后小鼠舌体大体观察结果（1％甲苯胺蓝染色）22.3不同照射剂量对头颈部照射小鼠口腔黏膜的影响正常小鼠舌黏膜组织结构完整，角化上皮细胞（舌尖、舌背）和非角化上皮细胞（舌腹）等结构正常。X射线照射后，舌尖和舌背的角化上皮结构紊乱，基底层排列不连续，其下出现大量炎性细胞浸润，毛细血管扩张充血，上皮厚度变薄（图3A）。在上皮厚度方面，以舌尖部分最敏感，15~18Gy照射组舌尖黏膜厚度明显变薄，与正常组相比均有显著差异（P<0.001）。舌背的黏膜层在15Gy照射剂量下表现为黏膜增生，上皮厚度较正常组略微增加，但差异无统计学意义；16Gy照射时，角化上皮结构崩解，但上皮厚度与正常组相比差异无统计学意义图1不同剂量X射线局部照射对C57小鼠体质量和存活的影响A.对照组及15、16、17、18Gy照射组小鼠30d体质量变化曲线；B.各组小鼠30d生存曲线189

黏膜,剂量,X射线,舌背

军事医学2020年3月第44卷第3期MilMedSci，Vol44，No3，Mar，2020（图3B）；17、18Gy照射时，舌背上皮厚度与正常组相比明显变薄，差异有统计学意义（P<0.001）（图3C）。22.4不同照射剂量对小鼠角化上皮细胞增殖的影响正常组小鼠角化上皮细胞增殖明显，增殖的细胞在基底层紧密排列。经X射线照射后，Ki67增殖细胞迅速减少（图4A），以舌尖部分的上皮细胞增殖抑制作用最显著，15~18Gy照射均能显著减少Ki67阳性细胞数量（P<0.001）（图4B）。舌背的上皮细胞在15Gy照射剂量下与正常组相比增殖细胞数量显著增加，差异有统计学意义（P<0.001），该结果与舌背在15Gy照射剂量下黏膜层增生的结果一致；16Gy照射时，固有层增殖细胞排列紊乱，但增殖细胞数量与对照组相比无明显减少；17、18Gy照射时，增殖细胞数显著降低，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05，P<0.001）（图4C）。图3不同剂量X射线局部照射对C57小鼠舌黏膜的影响A.小鼠舌尖、舌背部HE染色（比例尺为200μm）；B、C.各组舌尖和舌背上皮厚度的定量分析，***P<0.001，与正常对照组相比图4不同剂量X射线局部照射对角化上皮细胞增殖的影响A.小鼠舌尖、舌背部免疫组化Ki67检测（比例尺为200μm）；B、C.各组舌尖和舌背Ki67阳性细胞的定量分析，*P<0.05，***P<0.001，与正常对照组相比190
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