中度低温增强心肌细胞中的SUMO化并拮抗缺血缺氧再灌注损伤诱导的细胞凋亡

发布时间：2020-10-29 12:23

　　 目的观察中低温对H/R损伤后心肌细胞活力和线粒体功能的影响。检测中低温对H/R损伤后的心肌细胞中SUMO化水平的影响。探究SUMO化水平的变化对心肌细胞凋亡的影响。方法构建CoCl2和完全培养基诱导的H/R模型,33℃低温培养箱中培养H9c2和HL-1细胞来模拟低温治疗,实验分对照组、H/R组、低温治疗组,利用CCK8检测心肌细胞在三种不同的情况下的活性。流式细胞仪检测ROS产生量,共聚焦显微镜观察JC-1荧光来评估线粒体功能改变。Western印迹法检测SUMO1和SUMO2/3在各组的心肌细胞的表达水平,并检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和胱天蛋白酶-3的表达水平。构建SUMO1干涉质粒siRNA(si-SUMO1)转染H9c2和HL-1两种心肌细胞,实验分对照组、H/R组、低温治疗组、si-SUMO1组,用以上方法再次评估心肌细胞活性、细胞凋亡和线粒体功能。结果CCK8结果表明,与正常对照组相比H/R组中心肌细胞的活性显著降低。然而,低温组的细胞存活率与H/R组相比得到改善。流式细胞仪检测ROS和共聚焦显微镜观察的结果显示,与正常对照组相比,H/R组ROS产生量显著升高,线粒体膜电位显著降低,低温治疗组ROS产生量显著降低,线粒体膜电位显著升高。蛋白质免疫印迹结果显示,与对照组相比,SUMO1蛋白在H/R组的表达水平下降,但低温治疗组中的SUMO1蛋白的表达水平显著高于H/R组。同时检测了不同组之间的SUMO2/3的表达水平,但是与SUMO1蛋白的表达量不同,各组SUMO2/3蛋白的表达水平并没有显著变化。流式细胞术,蛋白质免疫印迹法和共聚焦显微镜观察结果表明通过低温治疗Bcl-2蛋白的表达和线粒体膜电位显著增加,而胱天蛋白酶3和线粒体ROS水平显著降低。当SUMO1被敲低时,线粒体ROS水平显着增加并且线粒体膜电位显着降低。这与低温保护心肌细胞的作用是相反的。结论中低温能增强心肌细胞的SUMO1表达水平并且SUMO1的高表达能够保护线粒体功能并拮抗心肌细胞的凋亡。图[5]幅;表[2]个;参[129]篇。
【学位单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R363
【部分图文】：

第 1 章 实验研究1.2 实验结果1.2.1 不同浓度 CoCl2对细胞活力的影响图 1.通过 CCK-8 分析不同浓度的 CoCl2对心肌细胞毒性的影响。如（图 1A 和B）所示，通过各种 CoCl2浓度（50,100,300 和 600μM）刺激 H9c2 和 HL-1 细胞。基于 CCK-8 的细胞毒性测定的结果表明，CoCl2剂量高于 300μM 显著降低的 H9c2 和HL-1 细胞的存活率。与对照组相比，50 和 100μMCoCl2的细胞存活率没有显着差异。随着 CoCl2浓度的增加,细胞毒性损伤在 600μM 时最大。具体地，与对照相比 CoCl2浓度在 300 和 600μM 时，各组之间有显著差异（*P <0.05; #P <0.05），数据表示为平均值±SE（N=5）。说明中度的治疗低温（33℃）拮抗心肌细胞中 H/R 诱导的细胞凋亡。

华北理工大学硕士学位论文降低（图 2B）（*P<0.05; #P<0.05）。通过共聚焦显微镜检测激光诱导的 JC-1 荧光的变化，以评估线粒体膜电位的早期变化（图 2C）。经中度低温治疗后，线粒体膜电位显着增加（图 2D）（*P<0.05; #P<0.05）。这些结果表明，适度低温有助于保持线粒体功能。

第 1 章 实验研究了 H/R 组中 SUMO1 蛋白表达的降低（图 3C）（#P<0.05）。令人惊讶的是，SUMO2/3 蛋白的表达没有显着差异（图 3D）。这里介绍的实验工作提供了关于低温如何调节 SUMO 化水平的首次研究之一。这些结果表明，在中度低温后，新SUMO1 缀合物的产生可发挥细胞保护作用。
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 胡君;熊存全;周红成;吴争鸣;;新生SD大鼠心肌细胞的原代分离和培养[J];健康之路;2016年09期

2 王有国;;急救:心绞痛与心肌梗死有区别[J];家庭医药.就医选药;2016年10期

3 宋新爱;林元喜;樊小力;;心肌细胞的纯化[J];中国病理生理杂志;2010年10期

4 崔晓兵;;人类成年心肌细胞可以更新[J];生理科学进展;2010年06期

5 李娜;;心肌细胞可以再生[J];科技导报;2009年08期

6 薛惠文;章静波;;人类心肌细胞的更新[J];基础医学与临床;2009年07期

7 刘赫;曹翠苹;刘国良;;高糖对心肌细胞的直接伤害作用[J];实用糖尿病杂志;2009年05期

8 吴越阳;铁璐;;~(14)C检测发现了人类心肌细胞更新的证据[J];生理科学进展;2009年04期

9 陈妍,邓英杰,郝艳丽,王振远,郭秀侠,福泉,苗志林;缺氧对心肌细胞摄取脂质体的影响[J];中国药物与临床;2004年11期

10 蔡明清;心肌细胞再生和腔室重塑[J];中国分子心脏病学杂志;2002年01期

相关博士学位论文 前10条

1 刘金华;TEAD1通过调节线粒体基因表达抑制心肌细胞坏死在小鼠心脏稳态的作用及机制研究[D];南昌大学;2019年

2 王丹宁;受磷蛋白及钙-ATP酶的生成、转运，对正常及心肌梗死大鼠心肌细胞钙调控的影响[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年

3 胡尹兰;抑制let-7i上调CCND2及E2F2促进心肌细胞再生及损伤后心脏功能恢复的研究[D];南方医科大学;2018年

4 张鹏;Wnt/JNK信号通路对心肌重构的调控及机制研究[D];重庆医科大学;2018年

5 周飞;程序性坏死在急性病毒性心肌炎的作用机制研究[D];武汉大学;2017年

6 史倞;微小RNA-17-3p促进生理性心脏生长及保护心脏缺血再灌注损伤的研究[D];南京医科大学;2016年

7 高伟;视黄醇结合蛋白4(RBP4)在促进小鼠心肌细胞病理性肥大中的作用及机制研究[D];南京医科大学;2016年

8 吴琼峰;TRPV4通道在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用及其机制[D];华中科技大学;2018年

9 奚望;线粒体功能障碍介导内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中对心肌细胞的功能影响及机制研究[D];中国人民解放军海军军医大学;2019年

10 周琼琼;类泛素蛋白FAT10通过稳定小窝蛋白3抑制缺血/缺氧诱导的心肌凋亡[D];南昌大学;2018年

相关硕士学位论文 前10条

1 路倩;心肌细胞核内的肌钙蛋白Ⅰ作为非经典转录因子调控ATP2a2/SERCA2a表达的机制研究[D];重庆医科大学;2019年

2 周雨森;高糖对H9C2心肌细胞miR-26表达的影响及其机制研究[D];蚌埠医学院;2019年

3 曹瑞平;线粒体ALDH2基因过表达对高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡的影响[D];蚌埠医学院;2019年

4 陈金生;中度低温增强心肌细胞中的SUMO化并拮抗缺血缺氧再灌注损伤诱导的细胞凋亡[D];华北理工大学;2019年

5 王珂;柯萨奇病毒B组3型结构蛋白VP2对心肌细胞损伤的机制初探[D];南昌大学;2019年

6 付佳兴;氨气暴露加剧脂多糖诱导的鸡心肌细胞程序性坏死[D];东北农业大学;2019年

7 刘丹;心肌细胞特异性敲除Cdc42对异丙肾上腺素诱导心肌纤维化的影响及其分子机制[D];南昌大学;2019年

8 郭建路;CaN/NFAT3介导线粒体乙醛脱氢酶2对高糖诱导的心肌损伤保护作用及机制研究[D];蚌埠医学院;2019年

9 彭茫;rAAV6介导miR361-PSR下调心肌细胞PDE9A基因表达的体外研究[D];湖南师范大学;2017年

10 宋小超;猝死肉鸡心脏损伤与心肌细胞线粒体损伤的相关性研究[D];河南科技学院;2019年

本文编号：2860895