中国猕猴浆母细胞的表型鉴定及其在筛选流感特异性抗体中的应用

发布时间：2020-10-31 22:28

　　 猕猴(macaca mulatta)是与人类更接近的动物物种,通常用作评估疫苗,同时也可以用于克隆与人源抗体高度相同的单克隆抗体。浆母细胞在人体中定义明确且易于分离,但仍不清楚是否可以将人的浆母细胞表型标记用于分离中国猕猴的浆母细胞。在本研究中,我们评估了一系列细胞表面和细胞内标记,并将中国猕猴浆母细胞的表型鉴定为CD3-CD14-CD56-CD19-CD27-CD20-/lowCD80+HLA-DR+CD95+。中国猕猴在接种流感病毒疫苗后,外周血单核细胞(PBMC)中的浆母细胞瞬时增加,在加强免疫接种后第4-7天达到高峰,并在第14天恢复到检测不到的水平。抗原特异性Elispot检测证实了分泌的流感特异性抗体来自这些浆母细胞。中国猕猴浆母细胞与人类浆母细胞相比,二者具有类似的转录特征。使用免疫球蛋白重链和轻链引物的单细胞PCR,可以在疫苗接种后第4-7天从中国猕猴CD3-CD14-CD56-CD19-CD27-CD20-.lowCD80+HLA-DR+CD95+浆母细胞克隆流感特异性单克隆抗体。我们的工作定义了用于分离抗体分泌的中国猕猴浆母细胞的表型标记,并且对于评估疫苗接种诱导的浆母细胞应答以及使用中国猕猴快速有效地克隆单克隆抗体具有重要意义。
【学位单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R392-33
【部分图文】：

?中国猕猴浆母细胞的表型鉴定及其在筛选流感特异性抗体中的应用???核糖核蛋白（ＲＮＰ）相互作用。ＲＮＰ由８个负链ＲＮＡ片段和核蛋白（ＮＰ）以??及聚合酶复合物异源三聚体（ＰＢ２，ＰＢ１和ＰＡ）组成，核输出蛋白（ＮＥＰ，或非??结构蛋白２，?ＮＳ２）包含在病毒体内，但非结构蛋白１?（ＮＳ１）不包含在病毒体内??［４８］。根据Ａ型流感的两种表面糖蛋白即血凝素和神经氨酸酶的抗原特性，进一??步将其分类为１８个ＨＡ亚型（Ｈ１－Ｈ１８）和１１个ＮＡ亚型（Ｎｌ－Ｎｌｌ），ＨＡ蛋白??对于结合细胞受体以及病毒和内体膜的融合至关重要，ＮＡ蛋白通过从细胞和病??毒ＨＡ和ＮＡ蛋白中去除唾液酸来促进病毒从感染细胞中释放［４５，５（），５１］。??

?中国猕猴浆母细胞的表型鉴定及其在筛选流感特异性抗体中的应用???Ｍａｒｋｅｒ?为?ＣＤ３—ＣＤ１９＋ＣＤ２〇－／ｂｗＣＤ２７ｈｌＣＤ３８ｈｉ，我们想确定人的浆母细胞?ｍａｒｋｅｒ??是否可以应用于中国猕猴的浆母细胞。我们分别取免疫流感疫苗志愿者和免疫灭??活流感病毒中国猕猴０天，免疫后７天，１４天，２８天的外周血，分离ＰＢＭＣ，??用人类浆母细胞细胞的表面Ｍａｒｋｅｒ去分析人与中国猕猴的浆母细胞。同时将浆??母细胞分选出来，用Ｂ细胞Ｅｌｉｓｐｏｔ验证是否分泌特异性的抗体。??Ｇａｔｅｄ?ｏｎ?ＣＤ３?ＣＤ１９＋ＣＤ２０々，ＯＷ??

ＣＤ３３?Ｖｉｒｕｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ??图２．１人的浆母细胞ｍａｒｋｅｒ不能鉴定中国猕猴的浆母细胞??图注：横坐标为ＣＤ３８分子，纵坐标为ＣＤ２７分子。Ｅｌｉｓｐｏｔ检验了免疫后７天时外周血??ＰＢＭＣ与用人浆母细胞Ｍａｒｋｅｒ分选到的人与猴子的浆母细胞。??我们发现人的浆母细胞Ｍａｒｋｅｒ是没有问题的，在免疫疫苗后人外周血中的??浆母细胞比例逐渐升高，在免疫后７天时，此时人外周血中浆母细胞的数量达到??顶峰，且大多数都是特异性的，随后比例逐渐下降。但是在中国猕猴外周血中利??用人的浆母细胞Ｍａｒｋｅｒ我们无法分选到分泌特异性抗体的浆母细胞，所以我们??得出结论，人类的浆母细胞Ｍａｒｋｅｒ无法应用于鉴定中国猕猴的浆母细胞，因此我??们需要鉴定中国猕猴浆母细胞的表型。??２．４．２人类浆母细胞高表达增值相关抗原Ｋｉ６７。??Ｋｉ６７为一种细胞增殖相关的核抗原，蛋白比较保守，其表达量与增殖速度??成正比。由于浆母细胞处于生发中心中
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本文编号：2864592