多重交叉置换扩增联合羟基萘酚蓝检测脓肿分枝杆菌方法的建立

发布时间：2020-11-01 06:44

　　 目的建立一种可视化的恒温扩增方法用于检测脓肿分枝杆菌(MAB)。方法采用特异性全长erm(41)基因建立基于多交叉置换扩增(MCDA)结合羟基萘酚蓝(HNB)的方法,通过比色法直接检测扩增产物,采用23株脓肿分枝杆菌复合群和8种细菌标准株对该方法进行初步评价。结果建立的MAB-MCDA-HNB检测限为100 fg的DNA模板。31株细菌菌株中,只有脓肿分枝杆菌检测结果为阳性,其它细菌包括结核分枝杆菌,卡介苗,马赛分枝杆菌、鸟分枝杆菌等非结核分枝杆菌和金黄色葡萄球菌等均为阴性。脓肿分枝杆菌模拟痰标本检测灵敏度为1.7×10~3 CFU/mL(每次反应17 CFU)。结论 MAB-MCDA-HNB方法能够快速准确诊断脓肿分枝杆菌的感染。
【部分图文】：

表2 多重交叉置换扩增引物信息Tab.2 MCDA primers information Primers Sequences (5′-3′) Length/bp F1 TGCTAGCCGTCGAGCT 16 CP1 GCAGGTCCGCTTCCGCTATTCGACACCTTCGTTCACG 37 C1 GCAGGTCCGCTTCCGCTAT 19 D1 GACATCTTCCTCGGCAAAC 19 R1 AATGGCCGTCGCGGCCA 17 R2 CCCTACCAAGTCACCAGC 18 D2 ACCTGGTGCTGCAGCG 16 C2 TACGGAGTCTCTTGACGCCGGAAT 24 CP2 TACGGAGTCTCTTGACGCCGGAATGCTTCGCATGTTTGTGC 41 F2 TGGCGAACAGGTGCTC 161.4 MAB-MCDA-HNB测定的标准化

在MAB-MCDA-HNB测定中使用系列稀释的脓肿分枝杆菌杆菌参考菌株(ATCC 19977)基因组DNA,最后我们证实低至100 fg的DNA模板可以启动MAB-MCDA反应(图2)。2.4 测定的特异性和灵敏度

在31种细菌菌株中,只有来自M. abscessus的DNA显示阳性结果,来自M. massilience、结核分枝杆菌、BCG、M. kansassi、M. smegmatis、M. phlei、M. avium和金黄色葡萄球菌的DNA模板表现为阴性结果(图3)。2.5 erm(41)PCR产物的片段大小
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本文编号：2865167