生物肽SP对NK-92MI细胞迁移及趋化因子受体表达的影响

发布时间：2020-11-01 18:25

　　 探讨生物肽P物质(substance P,SP)对NK92-MI细胞迁移力和细胞表面趋化因子受体表达的影响,能更好地解释SP调控NK细胞迁移的作用机制,为NK细胞的功能研究及潜在的免疫疗法提供补充依据。Transwell法检测SP对NK92-MI细胞迁移能力的影响及SP对趋化因子CCL21和CXCL12对NK92-MI细胞趋化作用的影响;Real-time PCR检测SP对CCR7和CXCR4 mRNA表达水平的影响;流式细胞术检测SP对CCR7和CXCR4膜表达水平的影响。结果显示:①SP促进NK92-MI细胞的迁移,是在低浓度范围(10~(-12)～10~(-10)mol/L)随SP浓度增加,促进作用逐渐增强,高浓度范围(10~(-8)～10~(-6) mol/L)随SP浓度增加,促进作用又有所减弱,SP浓度在10~(-10) mol/L时,趋化指数达峰值;SP增强趋化因子CCL21和CXCL12对NK92-MI细胞的趋化作用,这种增强作用在10~(-10) mol/L浓度最显著。②SP在10~(-12)～10~(-6) mol/L浓度范围内均能明显促进CCR7 mRNA的表达,且CCR7 mRNA表达水平随着SP浓度增加而增高;SP在10~(-10 )～10~(-6 ) mol/L浓度范围内能明显促进CXCR4 mRNA的表达。③CCR7的膜表达水平随着SP浓度的增加具有逐渐增高的趋势,在10~(-8) mol/L和10~(-6) mol/L浓度组,CCR7的表达有明显增加;而CXCR4的膜表达则随SP浓度的增加,具有先增高后回降的趋势,在10~(-10) mol/L和10~(-8) mol/L浓度组,CXCR4的表达有明显增加。SP能直接促进NK92-MI细胞的迁移,说明SP对NK细胞具有直接趋化作用;SP通过上调趋化因子受体CCR7和CXCR4的表达水平,协同趋化因子,间接发挥对NK-92MI细胞的趋化作用。
【部分图文】：

在10-12～10-10 mol/L浓度范围内,随着SP浓度的增加,其促进NK92-MI细胞迁移作用逐渐增强,1010 mol/L浓度时趋化指数达最大值(P<0.01),随浓度继续增加,SP促进NK92-MI细胞迁移能力逐渐减弱,结果如表2、图1所示。表2 SP对NK92-MI细胞迁移能力的影响Table 2 Effects of SP on migration ability in NK92-MI cells SP浓度/(mol·L-1) SP对NK92-MI细胞的趋化指数 对照 1.00 10-12 1.84±0.16* 10-10 3.17±0.17** 10-8 2.56±0.34** 10-6 1.78±0.22* 注:*与对照组相比P<0.05,**与对照组相比P<0.01,下表同

表3 SP增强趋化因子CCL21/CXCL12对NK92-MI细胞的趋化作用Table 3 SP enhanced chemotaxis of CCL21/CXCL12 on NK92-MI cells SP浓度/(mol·L-1) CCL21对NK92-MI细胞的趋化指数 CXCL12对NK92-MI细胞的趋化指数 对照 1.00 1.00 10-12 2.24±0.34* 2.48±0.23** 10-10 2.41±0.31* 2.81±0.11** 10-8 2.05±0.25* 2.48±0.28** 10-6 1.68±0.18 2.24±0.16**2.2 SP对NK92-MI细胞趋化因子受体CCR7和CXCR4 mRNA表达的影响

浓度范围为10-12～10-6 mol/L的SP作用24 h,CCR7阳性细胞百分率随着SP浓度的增高而增高,10-8 mol/L和10-6 mol/L浓度的SP可明显促进CCR7受体膜表达(P<0.05)(结果见图4A、图4C)。浓度范围为10-12 ～10-6 mol/L的SP作用24 h,CXCR4阳性细胞百分率均高于对照组,且随着SP浓度的增高,具有先增高后回降的趋势,10-10 mol/L和10-8 mol/L浓度组,CXCR4阳性细胞百分率有显著增高(P<0.01、P<0.05)(图4B、4C)。图4 SP对NK92-MI细胞趋化因子受体CCR7和CXCR4膜表达的影响
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