白纹伊蚊Cytb基因特异性引物的设计及评价

发布时间：2020-11-09 14:34

　　 目的设计并评价白纹伊蚊细胞色素b(Cytb)基因特异性引物。方法根据白纹伊蚊Cytb基因保守区域序列,设计1对引物,优化PCR扩增的退火温度。以白纹伊蚊及同属、同科、同目昆虫基因组DNA为样本,评价引物的特异性;以白纹伊蚊基因组DNA为样本,评价引物的灵敏性;扩增4个口岸捕获的8只白纹伊蚊,评价引物的重复性。结果设计的引物的最佳退火温度为55℃。该引物可成功扩增白纹伊蚊Cytb基因,不能扩增其同属、同种、同目昆虫基因;可扩增来自4个口岸的浓度1.9 ng/μl以上的白纹伊蚊基因组DNA。结论本研究设计的引物的特异性、灵敏性、重复性理想,适用于白纹伊蚊的鉴定。
【部分图文】：

当退火温度在53～55℃时，白纹伊蚊扩增条带明亮，当退火温度升高至56℃时，扩增条带亮度明显减弱。因此采用CytbAEDF/CytbAEDR引物进行检测，退火温度选择为55℃。2.3 引物的灵敏度

以白纹伊蚊基因组DNA原液和10-1～10-10稀释液为模板进行扩增，基因组DNA原液和10-1稀释液可见扩增条带，原液扩增条带清晰而10-1稀释液较弱，10-2～10-10稀释液未扩增到特异性产物。测序结果显示，原液、10-1稀释液扩增产物与目的基因片段相似度达100%。该引物可扩增浓度1.9 ng/μl以上的模板量。2.4 引物的重复性

提取8只白纹伊蚊的基因组DNA，使用引物CytbAEDF/CytbAEDR进行扩增和琼脂糖凝胶电泳，8次独立扩增均可获得清晰明亮的目的条带，测序结果与目的基因片段相似度为100%。该引物稳定性好，可用于日常检测。3 讨论
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本文编号：2876567