多肽浓度测定方法的比较研究与应用
发布时间：2020-11-17 16:55
目的随着蛋白质组学与多肽组学的发展,快速获取小分子多肽的浓度对研究多肽的性能及作用机制十分重要。目前实验室测定小分子多肽浓度的方法在难易度、适用范围、经济性等方面各有千秋,因此,有待我们提出一种快速简便的多肽浓度测定方法。方法将牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)与固相合成环肽CYE(NH_2-CYENLRSTC-COOH,C_1-C_9二硫键成环)、CLP(NH_2-CLPLWYPSC-COOH,C_1-C_9二硫键成环)及CHY(NH_2-CHYPTYSKC-COOH,C_1-C_9二硫键成环)溶液梯度稀释后分别使用消光系数法和BCA法进行吸光度测定,通过消光系数公式或标准曲线方程式计算相应浓度值,比较浓度计算值与理论值之间的差异并计算测定方法的精密度。将对羟磷灰石粉末可能有不同亲和力的多肽CYE与1018(VRLIVAVRIWRR)溶液进行梯度稀释,以非特异性吸附的BSA为对照,分别与25mg/mL羟磷灰石悬浮液在37℃下共同孵育1小时,离心后取上清液并应用个性化标准曲线的BCA法进行浓度测定,根据浓度计算结果评价BSA、CYE与1018在羟磷灰石粉末表面的吸附量。结果消光系数法的浓度计算值与理论值之间无明显统计学差异(P0.05)。BCA法中,以BSA作为标准品得到的多肽浓度计算值与理论值之间有显著统计学差异(P0.05);以待测多肽自身为标准品求得的多肽浓度计算值与理论值之间无明显统计学差异(P0.05);与待测多肽长度相同、分子量相近的多肽绘制个性化标准曲线求得的多肽浓度计算值与理论值之间存在统计学差异(P0.05),但求得的浓度计算值相比BSA标准曲线的浓度计算值更接近理论值(P0.05)。不同方法的精密度之间无明显统计学差异(P0.05)。应用多肽自身绘制个性化标准曲线的BCA法评价BSA、CYE与1018在羟磷灰石粉末表面的吸附量,结果表明,在浓度达到75μg/mL时,CYE与1018的吸附量到达平台期,而BSA有增加趋势。结论当多肽含有色氨酸或酪氨酸时可以使用消光系数法;当标准品在结构、疏水性等方面的性质越接近待测物,使用个性化标准曲线的BCA法得到的浓度计算值越准确,可用作多肽浓度的快速半定量测定。应用个性化标准曲线的BCA法能够评价多肽在羟磷灰石表面的吸附量。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R341
【部分图文】：
图 1 消光系数法浓度计算值与浓度理论值比较.2.2 BCA 法与个性化标准曲线的 BCA 法根据 BCA 法（标准品：BSA）与个性化标准曲线的 BCA 法（标准品：CYE、CLHY）的 4 条标准曲线得到的 4 个标准方程式，分别计算出 BSA 与多肽浓度（图 4）。标准曲线 R2均大于 0.99，线性关系良好。4 条标准曲线的斜率由大到小依 CHY＞CLP＞CYE＞BSA（P＜0.05），与肉眼所见形成的紫色络合物颜色深浅致。将各组浓度计算值与理论值相比较，如图 3 所示，在 BCA 法中，使用 BSA 标线计算得到的 CYE、CLP 与 CHY 的浓度计算值大于理论值，而使用 CYE、C CHY 的个性化标准曲线分别计算 BSA 的浓度值，其计算结果均小于理论值（P.05）；使用 CYE 标准曲线计算 CLP 与 CHY 的浓度，二者计算值均大于理论值（0.05）；使用 CLP 标准曲线计算 CYE 与 CHY 的浓度，CYE 浓度计算值小于理
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 与 CLP 浓度，二者计算值均小于理论值（P＜0.05）。述结果可知，不管是 BCA 法还是个性化标准曲线的 BCA 法，使用 BSA是 CYE、CLP 与 CHY 个性化标准曲线得到的浓度计算值与理论值之间均异。比较不同标准曲线下的浓度计算值与理论值之间的差值的统计学差异果表明，个性化标准曲线的 BCA 法的浓度计算值比 BCA 法的浓度计算值值（P＜0.05）。
图 3 不同标准曲线计算同一蛋白或多肽的浓度计算值与理论值的比较2.2.3 BSA、CYE、CLP 与 CHY 标准曲线计算自身浓度分别用 BSA、CYE、CLP 与 CHY 标准曲线计算自身浓度，其标准方程及 R2如表5 所示。计算结果表明 BSA、CYE、CLP 以及 CHY 通过自身标定计算的浓度计算值均与理论值无明显统计学差异（P＞0.05）（图 4）。R2均大于 0.99，线性良好。表 5 自身个性化标准曲线的 BCA 法标准曲线公式及 R 平方值Satandard Satandard curve R2BSA y = 0.0003x + 0.1216 0.9961CYE y = 0.0005x + 0.1205 0.9987CLP y = 0.0010x + 0.1105 0.9993CHY y = 0.0013x + 0.1292 0.9978
【相似文献】
本文编号：2887721
【学位单位】：华中科技大学
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【部分图文】：
图 1 消光系数法浓度计算值与浓度理论值比较.2.2 BCA 法与个性化标准曲线的 BCA 法根据 BCA 法（标准品：BSA）与个性化标准曲线的 BCA 法（标准品：CYE、CLHY）的 4 条标准曲线得到的 4 个标准方程式，分别计算出 BSA 与多肽浓度（图 4）。标准曲线 R2均大于 0.99，线性关系良好。4 条标准曲线的斜率由大到小依 CHY＞CLP＞CYE＞BSA（P＜0.05），与肉眼所见形成的紫色络合物颜色深浅致。将各组浓度计算值与理论值相比较，如图 3 所示，在 BCA 法中，使用 BSA 标线计算得到的 CYE、CLP 与 CHY 的浓度计算值大于理论值，而使用 CYE、C CHY 的个性化标准曲线分别计算 BSA 的浓度值，其计算结果均小于理论值（P.05）；使用 CYE 标准曲线计算 CLP 与 CHY 的浓度，二者计算值均大于理论值（0.05）；使用 CLP 标准曲线计算 CYE 与 CHY 的浓度，CYE 浓度计算值小于理
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 与 CLP 浓度，二者计算值均小于理论值（P＜0.05）。述结果可知，不管是 BCA 法还是个性化标准曲线的 BCA 法，使用 BSA是 CYE、CLP 与 CHY 个性化标准曲线得到的浓度计算值与理论值之间均异。比较不同标准曲线下的浓度计算值与理论值之间的差值的统计学差异果表明，个性化标准曲线的 BCA 法的浓度计算值比 BCA 法的浓度计算值值（P＜0.05）。
图 3 不同标准曲线计算同一蛋白或多肽的浓度计算值与理论值的比较2.2.3 BSA、CYE、CLP 与 CHY 标准曲线计算自身浓度分别用 BSA、CYE、CLP 与 CHY 标准曲线计算自身浓度，其标准方程及 R2如表5 所示。计算结果表明 BSA、CYE、CLP 以及 CHY 通过自身标定计算的浓度计算值均与理论值无明显统计学差异（P＞0.05）（图 4）。R2均大于 0.99，线性良好。表 5 自身个性化标准曲线的 BCA 法标准曲线公式及 R 平方值Satandard Satandard curve R2BSA y = 0.0003x + 0.1216 0.9961CYE y = 0.0005x + 0.1205 0.9987CLP y = 0.0010x + 0.1105 0.9993CHY y = 0.0013x + 0.1292 0.9978
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