尼古丁对大鼠下丘脑室旁核小细胞神经元活动的影响

发布时间：2017-04-06 19:01

  本文关键词：尼古丁对大鼠下丘脑室旁核小细胞神经元活动的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]下丘脑室旁核(PVN)小细胞神经元调控自主神经活动,在心血管功能、神经内分泌活动及能量代谢调节方面起重要作用。在体实验研究表明,尼古丁可活化PVN神经元烟碱样受体,影响摄食、能量代谢和神经内分泌功能,然而在离体条件下,活化烟碱样受体对PVN小细胞神经元活动影响机制尚无报道。因此,本研究联合应用膜片钳记录、组织化学和神经药理学等技术手段,在新生大鼠下丘脑切片上观察尼古丁对大鼠下丘脑小细胞神经元自发性放电和兴奋性突触后电流(sEPSC)活动的影响；研究尼古丁对自发性活动影响的剂量依存性以及半数有效浓度；探讨PVN内尼古丁敏感小细胞神经元的组织学特征；明确尼古丁对PVN小细胞神经元的影响机制,有助于阐明尼古丁对心血管及下丘脑神经内分泌功能活动的调节机理。[材料与方法]出生后14-21d的Wistar雄性的大鼠。使用异氟烷深度麻醉后,断头取脑,使用莱卡1200S全自动振动切片机制备厚度为250μm、内含PVN的下丘脑切片。在室温下,将下丘脑切片置于充95%02和5%C02混合气体的人工脑脊液中孵育1h以上。人工脑脊液由以下成分构成(in mM)：118 NaCl,3 KCl, 1 MgCl2·6H2O,1 NaH2PO4·2H2O,25 NaHCO3,10 D-Glucose,2 CaCl2; PH:7.3-7.4,渗透压为295-305 mOsM。记录电极内灌装10μl内液,电极阻抗为4-6 MΩ。联合应用全细胞膜片钳、生物素染色和神经药理学手段研究尼古丁对PVN小细胞神经元自发性放电频率、膜电位和sEPSCs的影响。PVN神经元全细胞膜片钳记录是通过Axon-700B膜片钳放大器、Digidata 1400 A系列数模转换器、Clampex10.4数据包和电脑来实现的,数据采集后存于移动硬盘和DVD光盘用于分析,只有记录完整且基线稳定的实验数据用于数据处理和统计学分析。实验结束后脑片用4%多聚甲醛在室温下固定24h后,然后置于生物素复合物中过夜。通过DAB组织化学检测生物素分布,显微镜下分析记录细胞的组织学特征。采用Clampfit10.4软件对电生理实验数据进行分析,采用SPSS软件进行数据统计学分析,均数的比较采用配对T检验,P0.05认为有统计学差异。[结果](1)PVN小细胞神经元胞体平均直径为12.6±1.10μm,树突个数为2-6个；自发性放电频率为2.21±0.24 Hz,平均膜电位为-54.7±1.3 mV。(2)在电流钳记录模式下,灌流尼古丁(1μM)可使46.6%的PVN小细胞神经元产生可逆性膜电位去极化和放电频率增加。(3)尼古丁对部分PVN小细胞神经元自发性活动的兴奋作用具有剂量依存性,半数有效抑制浓度为13μM。(4)尼古丁可显著增加尼古丁敏感PVN小细胞神经元兴奋性突触电流(EPSCs)的发生频率,但对EPSCs振幅影响不大。提示尼古丁诱发PVN敏感神经元兴奋可能与其突触前行为有关。[结论]尼古丁兴奋PVN烟碱能传人纤维,导致部分PVN小细胞神经元产生膜去极化,增加自发性放电和sEPSCs频率。
【关键词】：尼古丁 下丘脑室旁核 小细胞神经元 全细胞膜片钳记录 生物素染色 自发性放电
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 英文缩写词11-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 材料与方法16-19
• 1. 试验材料16-17
• 1.1 实验动物及脑片制备16
• 1.2 实验仪器设备16
• 1.3 实验用药16-17
• 2 实验方法与步骤17-19
• 2.1 全细胞膜片钳记录及生物素染色17
• 2.2 生物素染色17-18
• 2.3 统计学分析18-19
• 第三章 实验结果19-25
• 3.1 PVN小细胞神经元的电生理与组织学特征19-20
• 3.2 尼古丁对PVN处小细胞神经元自发性放电活动的影响20-23
• 3.3 尼古丁对PVN敏感小细胞神经元兴奋性性突触后电位的影响23-25
• 第四章 讨论25-27
• 第五章 结论27-28
• 参考文献28-30
• 综述 尼古丁对神经元活动及突触传递的作用30-45
• 1. 尼古丁的理化性质30-31
• 2. 尼古丁受体31-32
• 3. 尼古丁对突触传递及递质释放的影响32-35
• 4. 尼古丁的神经保护功能35-37
• 参考文献37-45
• 致谢45

【参考文献】

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1 罗兰,张维宁,郑元林,吴馥梅;ACTH_(4-9)类似物对小鼠海马突触体Ca~(2+)水平的调节作用[J];生理学报;1998年04期

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本文编号：289449