家蝇抗真菌衍生肽Mt6-21DLeu抗白色念珠菌活性及其机制研究

发布时间：2020-12-05 04:20

　　目的设计家蝇抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探讨其抗白色念珠菌（Candida albicans, Ca）活性及作用机制。方法通过氨基酸替换法设计MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液体稀释法测定Mt6-21DLeu对Ca的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MFC）以及不同环境中Mt6-21DLeu对Ca抑菌活性的变化;通过时间-杀菌曲线反映Mt6-21DLeu对Ca的杀菌动力学;通过结晶紫染色测定Mt6-21DLeu对Ca不同阶段生物被膜的清除作用;采用多功能酶标仪检测荧光探针DPH的相对荧光密度;荧光显微镜观察Mt6-21DLeu的细胞膜通透性;采用流式细胞仪检测Mt6-21DLeu影响Ca活性氧ROS生成的影响。结果与MAF-1A相比,Mt6-21DLeu抑制Ca生长的效果提高近5倍,其MIC和MFC分别为0.128 mg/ml和0.256 mg/ml。在盐离子环境中,Mt6-21DLeu活性几乎不受影响,胰酶环境对Mt6-21DLeu有所抑制但远小于对MAF-1A活性的干扰。时间-杀菌曲线结果显示在MIC和2 MIC浓度下,Mt6-21DLeu于... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020年07期 第761-767页 北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

MAF-1A与Mt6-21DLeu的螺旋图

Time-kill Curve检测结果见图2。1 MIC和2 MIC浓度下的Mt6-21DLeu从12 h开始逐渐有抑制Ca生长作用,且随着培养时间的延长抑制作用更加明显。4 MIC浓度的Mt6-21DLeu在作用3 h即出现杀菌功效,表明Mt6-21DLeu对Ca的杀菌作用呈现明显的剂量依赖性。5 生物被膜检测

膜电位荧光探针1,6-二苯基-1,3,5-乙三烯(1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene,DPH)能在不干扰细胞膜结构的前提下嵌入细胞膜的脂质双分子层中,其荧光的强弱反映细胞膜的流动性和有序性,即DPH荧光强度的降低提示细胞膜呈较低的结构有序性或较高的流动性[10-11]。图4A显示,1、2、4 MIC浓度的Mt6-21DLeu分别作用于Ca后,DPH的相对荧光强度从对照组的(100±6.52)%降至(86.38±17.38)%、(56.50±2.56)%和(54.16±2.64)%,提示Ca的细胞膜结构遭到Mt6-21DLeu破坏。随着Mt6-21DLeu浓度的提高,能被PI着色的Ca菌体比例增加(图4B),表明Mt6-21DLeu浓度越高,越容易导致细胞膜的破坏。图4 Mt6-21DLeu对Ca细胞膜的损伤

【参考文献】：
期刊论文
[1]家蝇幼虫血淋巴抗真菌肽MAF-1的分子特性分析及其抗真菌作用[J]. 涂涛田,季恒青,国果,付萍,吴建伟.  昆虫学报. 2012(09)

博士论文
[1]两类天然产物的抗真菌活性及作用机制研究[D]. 李颖.山东大学 2016



本文编号：2898862