上海2株严重急性呼吸综合征冠状病毒2的分离与鉴定

发布时间：2020-12-06 06:27

　　目的从新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者鼻/咽拭子样本中分离、培养严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）。方法将来自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子样本以TPCK胰酶处理,然后接种Vero E6细胞;待大部分细胞出现明显病变时,取细胞培养上清用qRT-PCR法检测病毒核酸,并用反转录PCR扩增病毒受体结合区（RBD）基因片段;将病毒扩增培养后感染接种于96孔板中的Vero E6细胞,观察细胞病变效应,并用免疫荧光法检测病毒蛋白。结果 2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本接种的Vero E6细胞出现明显细胞病变效应,细胞培养上清中检测出新复制产生的SARS-CoV-2核酸,扩增出的RBD序列与早期分离出的SARS-CoV-2相应序列完全一致;病毒感染的Vero E6细胞病变迅速,并能与SARS-CoV-2核衣壳蛋白（N蛋白）单克隆抗体、刺突蛋白（S蛋白）单克隆抗体及COVID-19患者恢复期血清发生反应。结论从2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本中成功分离出SARS-CoV-2,为后续开展SARS-CoV-2感染与致病机制研究、防治药物与疫苗的研发奠定了... 

【文章来源】：第二军医大学学报. 2020年04期 第365-370页 北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

免疫荧光检测SARS-CoV-2蛋白

用反转录PCR分别扩增S2、S3株SARS-CoV-2 S基因的RBD区序列,测序结果如图4所示,2株病毒的S基因RBD区序列与最早完成基因组测序的SARS-CoV-2 病毒株(GenBank登录号:NC＿045512)RBD区序列一致。图2 SARS-CoV-2感染的Vero E6细胞的细胞病变效应

SARS-CoV-2感染的Vero E6细胞的细胞病变效应

【参考文献】：
期刊论文
[1]新型冠状病毒上海株（nCoV-SH01）的分离和鉴定[J]. 张荣,易志刚,王玉燕,滕峥,徐巍,宋武慧,蔡霞,孙志平,谷陈建,周艳秋,陈洪友,叶荣,韩文东,朱云凯,冯飞,房方皓,李崇山,张曦,瞿涤,付晨,谢幼华,袁正宏.  微生物与感染. 2020(01)
[2]冠状病毒的致病性及防控[J]. 闻玉梅.  微生物与感染. 2020(01)



本文编号：2900895