人副流感病毒2型感染恒河猴肾细胞后内参基因的筛选

发布时间：2020-12-06 16:12

　　目的评价阳性药物利巴韦林治疗人副流感2型病毒（HPIV-2）感染恒河猴肾细胞(LLC-MK2后甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1（Hprt1）、β-肌动蛋白（β-actin）、肽基脯氨酰异构酶A（Ppia）、β2微球蛋白（B2M）5种内参基因的表达稳定性。方法 HPIV-2感染LLC-MK2 48h和72h,采用real-time PCR法测定病毒组、利巴韦林治疗组和正常细胞对照组中上述5种内参基因的表达水平,利用geNorm程序对它们的稳定性进行评价。结果 5种内参基因均能稳定表达,其中GAPDH和Hprt1在感染后48h稳定度相同,且最稳定;Ppia和Hprt1在感染后72h稳定度相同,且最稳定。结论 Hprt1、GAPDH和Ppia是抗HPIV-2药物体外筛选和研究HPIV-2与LLC-MK2相互作用最理想的内参基因。 

【文章来源】：重庆医学. 2020年17期 第2861-2866页

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

接种HPIV-2 72h后病毒组、正常细胞对照组和利巴韦林治疗组LLC-MK2细胞形态学观察

以Ct值为纵坐标，相对拷贝数为横坐标构建GAPDH、Hprt1、β-actin、Ppia、B2M 5个基因的标准曲线，结果各内参基因的扩增效率在89.4%～94.3%，各内参基因的标准曲线决定系数（R2）均大于98%，具有良好的线性关系，满足qPCR条件，见表2。2.4 内参基因的表达稳定性

通过geNorm程序分析5个内参基因在HPIV-2感染LLC-MK2 48h后的病毒组、利巴韦林治疗组和正常细胞对照组平均表达稳定度，得到内参基因的平均表达稳定度排列顺序为GAPDH=Hprt1(M=0.115)>B2M(M=0.218)>Ppia(M=0.362）>β-actin(M=0.450），它们的M值均小于1.5，说明这5个内参基因均能在LLC-MK2感染HPIV-2及利巴韦林治疗48h后稳定表达，其中GAPDH和Hprt1是表达最稳定的内参基因，见图4A。geNorm程序内参基因标准化因子配对变异分析Vn/（n+1）显示，Vn/（n+1）值均低于0.15，其中，V2/3为0.088，提示使用2个内参基因即可，没有必要再选第3个或3个以上数目内参基因进行校正，见图4B。图4 geNorm程序分析HPIV-2感染LLC-MK2 48h时的理想内参基因

【参考文献】：
期刊论文
[1]H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞后内参基因的筛选[J]. 朱鑫,吴巧,冯晓辉,汤承,岳华.  西南民族大学学报(自然科学版). 2014(04)



本文编号：2901666