干扰素刺激基因12a对寨卡病毒复制的影响及其作用机制

发布时间：2020-12-07 11:43

　　目的探究干扰素刺激基因（ISG）12a对寨卡病毒（ZIKV）复制的影响和作用机制。方法通过质粒转染（2μg ISG12a）或者siRNA（20μmo/Ll）沉默分别上调或者抑制A549细胞（细胞密度2×10⁵/mL）中ISG12a的表达,再用ZIKV（MOI=1）感染A549细胞,48 h后收样,采用RT-qPCR以及Western blot等方法检测ZIKV的RNA的复制水平及宿主抗病毒先天免疫相关基因表达水平;将1μg含有干扰素刺激应答元件（ISRE）的萤火虫荧光报告质粒（ISRE-luc）和2 ng海肾荧光质粒（pRL-TK）与1μg的ISG12a质粒共转入2×10⁵/mL的A549细胞中24 h,用ZIKV（MOI=1）感染A549细胞24 h,用终浓度为100 IU/mL IFNβ再处理细胞24 h后收样,用双荧光报告基因试验检测ISRE活性;在2×10⁵/mL的A549细胞中转染2μg ISG12a质粒,24 h后用ZIKV（MOI=1）感染A549细胞24 h,用终浓度为100 IU/mL IFNβ再处理细... 

【文章来源】：中国输血杂志. 2020年05期 第446-452页

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

在mRNA水平抑制ISG12a表达促进ZIKV复制

RT-qPCR检测:ZIKV能够感染A549细胞,并且随着感染时间的延长,细胞内病毒RNA水平逐渐增加(图1-A);随着时间的延长,至72 h时ISG12a表达明显增高(图1-B)。2.2 外源性IFNβ诱导ISG12a高表达

RT-qPCR检测:与空载组相比,转染剂量(μg)为0.5、1和2的3组中ISG12a相对值为12.285 9±0.445 9、23.399 9±3.155 2、42.896 9±1.049 1(P<0.05或<0.01)(图3-A);实验组ISG12a相对值253 3.544 4±74.859 6(P<0.01),ZIKV RNA分子的相对值为0.438 8±0.011(P<0.01)。WB确认: ISG12a在蛋白水平成功高表达(图3-B)并抑制ZIKV的复制(图3-E)。2.4 抑制ISG12a的表达促进ZIKV的复制


本文编号：2903185