EV71 VP1单克隆抗体的制备及抗原表位分析

发布时间：2020-12-07 19:32

　　肠道病毒感染可引发手足口病（HFMD）,HFMD属于急性传染病,婴幼儿为主要发病人群。临床上患者年龄越小对身体危害越为严重,常出现发病迅速、病情加重趋势明显,愈后不理想等临床症状。目前,HFMD已经对婴幼儿的身体健康甚至生命安全造成了严重威胁。肠道病毒71型（EV71）作为HFMD主要病原体之一,感染性强,可以导致HFMD较高的发病率,症状严重者则表现出神经系统症状,且已有死亡病例出现。目前,EV71常见检测方法有:细胞接种、乳鼠接种、血清中和试验以及RT-PCR方法,这些方法成本高,耗时长且RT-PCR常易出现假阳性,给早期临床诊断带来了一定的困扰。因此,建立一种又快又准且易于操作的检测方法,已经成为当前EV71诊断工作的迫切要求。本试验结合单抗和ELISA方法的优势,开展EV71 VP1单抗的制备,并以此为基础,建立了EV71双抗夹心ELISA方法。本论文以真核表达载体EV71 PcDNA3.1-VP1质粒为免疫抗原,通过细胞融合及三次亚克隆筛选,获得了EV71 VP1单抗两株,分别命名为单抗CL-I和单抗CL-II。本论文应用在线分析软件对EV71 VP1基因进行生物信息学分析,... 

【文章来源】：长春理工大学吉林省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

EV71病毒[15]

单克隆抗体制备流程

表 2-4 血清检测结果× 400× 800× 1600× 3200× 6400× 12800× 阴8 1.486 1.379 1.213 0.896 0.698 0.526 0.11 11.79 10.94 9.63 7.11 4.54 4.17所有实验组免疫鼠血清抗体水平，检测 P/N≥2.1，免疫以进行细胞融合。细胞株建立合、筛选和 3 次亚克隆，最后获得 2 株分泌抗 EV71 VP单抗 CL-I、单抗 CL-II。见图 2.1。

【参考文献】：
期刊论文
[1]手足口病实验室检测方法的研究进展[J]. 欧晓燕,许彬.  分子诊断与治疗杂志. 2018(06)
[2]2016-2017年盐城地区手足口病病原谱构成及EV71型肠道病毒VP1基因特征[J]. 陈国清,李春香,王瑶,李峰,徐士林,李长城,邵荣标.  现代预防医学. 2018(13)
[3]肠道病毒71型鼠源性中和单克隆抗体的制备[J]. 朱文兵,严丽蔚,巩蔚,张雪梅,吴忠香,徐婧雯,宋杰,董少忠.  中国生物制品学杂志. 2018(03)
[4]肠道病毒71型免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 吴晓卫,翟建新,朱欢,钟文杨,王乐,张利.  华南预防医学. 2018(01)
[5]吉林省2013年肠道病毒71型VP1编码区基因特征分析[J]. 魏雷雷,周剑惠,杨尧,沈博,单元春,黄飚.  中国卫生检验杂志. 2016(10)
[6]2014—2015年我国新发传染病临床诊治与相关研究进展[J]. 张昕,徐哲,陈威巍,姜天俊,王福生.  传染病信息. 2016(01)
[7]人肠道病毒71型高致病性毒株及其体外适应株cDNA感染性克隆的构建[J]. 张永欣,李晓宇,黄宇明,周永东,毕胜利,岑山.  病毒学报. 2014(06)
[8]pH值对胶体金标记单克隆抗体性能的影响[J]. 孙园园,王云龙,李玉林,王继创,程蕾,邓黎黎.  细胞与分子免疫学杂志. 2014(11)
[9]抗肠道病毒71型特异性卵黄抗体的制备及鉴定[J]. 朱思思,赵肃清,李月明,温俊林.  中国免疫学杂志. 2011(10)
[10]EV71非结构蛋白的结构和功能及其为靶点的药物研究进展[J]. 秦咸蕴,林霖,杨燕,张书香,孔建强,程克棣,赵云峰,王伟.  药学学报. 2011(07)

博士论文
[1]抗EV71病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究[D]. 张潇.北京工业大学 2015
[2]2009-2011年广东EV71致手足口病临床病原特征及EV71衣壳蛋白P1单克隆抗体制备[D]. 余楠.南方医科大学 2012

硕士论文
[1]胞内分枝杆菌ELISA检测试剂盒的研制[D]. 宋力强.长春理工大学 2018
[2]肠道病毒71型结构蛋白VP1及其肽段的生物学活性研究[D]. 马英伟.山东大学 2016



本文编号：2903786