IL-35重组卡介苗的构建及鉴定

发布时间：2020-12-09 12:54

　　目的:构建分泌性表达白细胞介素（IL）-35真核载体pZM03（pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM）-重组卡介苗（BCG）。方法:在化学合成的IL-35基因片段中插入pBudCE4.1/GLS/OriM,将合成后序列插入到IL-12真核共表达载体pBudCE4.1/GLS/IL12/OriM的质粒酶切回收产物pBudCE4.1/GLS/OriM中,构建表达IL-35的穿梭/共表达质粒重组质粒pZM03（pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM）,再以重组质粒电转化到BCG,构建表达IL-35和BCG的重组pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM-BCG。结果:重组质粒pZM03（pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM）经PCR扩增、测序鉴定,以及在CHO 293T细胞中表达产物的Western blotting检测,从转录和翻译水平对目标基因产物进行检测验证,pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM-BCG在细胞水平经抗酸染色验证,证实基因IL-35正确插入载体pBudCE4.1/GLS/OriM中,且pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM... 

【文章来源】：蚌埠医学院学报. 2020年07期 第849-853+858页

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 主要试剂
        1.1.2 质粒和宿主菌
    1.2 实验方法
        1.2.1 IL-35序列的设计
        1.2.2 pZM03（pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM）质粒的构建
        1.2.3 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM质粒在CHO293T细胞中的表达验证
        1.2.4 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM重组BCG的构建
2 结果
    2.1 pBudCE4.1/GLS/IL12/OriM质粒酶切电泳
    2.2 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM重组质粒的菌落PCR鉴定
    2.3 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM重组质粒在CHO293T细胞中表达产物的Western blotting检测
    2.4 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM-MS重组菌的PCR鉴定
    2.5 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM-MS重组菌抗酸染色
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]新生期卡介苗和乙肝疫苗联合接种对哮喘小鼠IFN-γ、IL-4和IL-17A表达的影响[J]. 沈雪艳,陈三妹,陈小萍,邢海燕,赵伟英,陈志华.  中国病理生理杂志. 2018(03)
[2]舌下特异性免疫治疗过敏性鼻炎/过敏性哮喘患儿IL-17和IL-35水平的变化及临床疗效[J]. 丁莲富,陈强,李岚,刘建梅,章高平,朱晓华,吴爱民,柯江维,戴玉兰,吴春雪.  中国当代儿科杂志. 2014(12)
[3]治疗性疫苗的研究进展[J]. 闻玉梅.  中华微生物学和免疫学杂志. 1996(03)

博士论文
[1]IL-12+重组卡介苗新生期接种干预实验性哮喘模型的作用及其机制研究[D]. 邓昱.重庆医科大学 2010
[2]柔嫩艾美耳球虫rhomboid基因重组卡介苗的构建及其免疫保护性研究[D]. 王秋悦.吉林大学 2009



本文编号：2906893