两株残翼病毒分子特性及原核表达的VP2免疫原性研究
发布时间：2020-12-13 19:27
目的本研究通过对从中国锦州和秦皇岛地区分离得到两株残翼病毒（Deformed wing virus,DWV）毒株China1-2017（MF770715）和China2-2018（MH165180）的遗传进化关系和重组情况进行分析,全面了解在中国分离到的DWV遗传背景及其未来流行趋势,为DWV防治提供参考。通过对DWV结构蛋白VP2的免疫原性研究,探讨VP2作为免疫原制备DWV相关生物制剂的可能性,为DWV深入研究和用于DWV防治的生物制剂研发提供理论依据。方法根据NCBI上公布的美国分离株DWV（GenBank登录号AY292384）和韩国分离株DWV（GenBank登录号JX878304）的基因组序列设计17个引物,分别对来自中国锦州和秦皇岛地区的2株DWV（分别命名为China1-2017和China2-2018）进行PCR扩增,获得其完整基因组序列,将分离到的China1-2017和China2-2018序列与来自不同国家的18株DWV分离株,及与DWV密切相关的两个病毒Kakugo病毒（KV）和Varroa destructor virus-1（VDV-1）作为参考序列进行同...
【文章来源】：锦州医科大学辽宁省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DWVRT-PCR检测注：M:DL2000DNAMaker；A：A.melliferaPCR扩增产物；B：A.ceranaPCR扩增产
注：A 基于 DWV 的 ORF 编码核苷酸序列的系统发育树。B 基于 DWV VP1 区段的系统发育树。C 基于 DWV 的 3C + RdRp 段的系统发育树。所有系统发育树都是通过最大似然法（ML）方法和 Komura 2 参数方法构建的，具有自助重采样（1000 次重复）。 系统发育树的每个分支处的数字代表自举值（1000 个重复）。 不同颜色的三角形表示DWV 分离株的不同簇。
在所有 9 个潜在的重组信号中，China2-2018 毒株在 4266-7507nt 位置重组（图 4B 和图 5A），RDP，GENECONV，Bootscan，MAXCHI 四个算法中P 值均小于 1.0E-6，表明重组是存在的（表 2）。同时， KV-2001 毒株（信号2）在 7500-8908nt 和 China-2017 毒株 1315-1878nt 位置的重组 RCS 值分别为 0.621 和 0.606，均大于 0.6，也说明重组也是存在的（表 2）。此外，其他6 个重组 RCS 值在 0.4-0.6 之间，说明也具有重组的可能性（表 2）。通过对存在的重组进一步分析发现，China2-2018 毒株在 4266-7507nt 位置的重组可能以 China-2017 作为次要亲本（图 5A-C），并且跨越整个解旋酶区域（图 4）。China-2017 毒株的重组发生于 1315-1878nt，以 KV-2001 为主要亲本，China1-2017 为次要亲本，编码前导多肽氨基酸序列（LP）（图 4 和图 5D-F）。另外，KV-2001 重组发生于 7500-8908nt，以 China2-2018 毒株作为次要亲本（图 4B 和表 2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白VP2的密码子优化表达及其免疫原性研究[J]. 李芳兵,费东亮,张皓淳,胡影,魏东,张鹤,岳金金,马鸣潇,曲祖乙. 病毒学报. 2017(02)
[2]我国东、西方蜜蜂中七种病毒感染状况的调查[J]. 丁桂玲,石巍. 畜牧兽医学报. 2015(10)
[3]人胱抑素C的原核表达及包涵体复性研究[J]. 李江峰,钱伟,王继华,才蕾. 药物生物技术. 2015(05)
[4]安徽省七种蜜蜂病毒的发生与流行研究[J]. 汪天澍,施腾飞,刘芳,余林生,齐磊,孟祥金. 应用昆虫学报. 2015(02)
本文编号：2915055
【文章来源】：锦州医科大学辽宁省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DWVRT-PCR检测注：M:DL2000DNAMaker；A：A.melliferaPCR扩增产物；B：A.ceranaPCR扩增产
注：A 基于 DWV 的 ORF 编码核苷酸序列的系统发育树。B 基于 DWV VP1 区段的系统发育树。C 基于 DWV 的 3C + RdRp 段的系统发育树。所有系统发育树都是通过最大似然法（ML）方法和 Komura 2 参数方法构建的，具有自助重采样（1000 次重复）。 系统发育树的每个分支处的数字代表自举值（1000 个重复）。 不同颜色的三角形表示DWV 分离株的不同簇。
在所有 9 个潜在的重组信号中，China2-2018 毒株在 4266-7507nt 位置重组（图 4B 和图 5A），RDP，GENECONV，Bootscan，MAXCHI 四个算法中P 值均小于 1.0E-6，表明重组是存在的（表 2）。同时， KV-2001 毒株（信号2）在 7500-8908nt 和 China-2017 毒株 1315-1878nt 位置的重组 RCS 值分别为 0.621 和 0.606，均大于 0.6，也说明重组也是存在的（表 2）。此外，其他6 个重组 RCS 值在 0.4-0.6 之间，说明也具有重组的可能性（表 2）。通过对存在的重组进一步分析发现，China2-2018 毒株在 4266-7507nt 位置的重组可能以 China-2017 作为次要亲本（图 5A-C），并且跨越整个解旋酶区域（图 4）。China-2017 毒株的重组发生于 1315-1878nt，以 KV-2001 为主要亲本，China1-2017 为次要亲本，编码前导多肽氨基酸序列（LP）（图 4 和图 5D-F）。另外，KV-2001 重组发生于 7500-8908nt，以 China2-2018 毒株作为次要亲本（图 4B 和表 2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白VP2的密码子优化表达及其免疫原性研究[J]. 李芳兵,费东亮,张皓淳,胡影,魏东,张鹤,岳金金,马鸣潇,曲祖乙. 病毒学报. 2017(02)
[2]我国东、西方蜜蜂中七种病毒感染状况的调查[J]. 丁桂玲,石巍. 畜牧兽医学报. 2015(10)
[3]人胱抑素C的原核表达及包涵体复性研究[J]. 李江峰,钱伟,王继华,才蕾. 药物生物技术. 2015(05)
[4]安徽省七种蜜蜂病毒的发生与流行研究[J]. 汪天澍,施腾飞,刘芳,余林生,齐磊,孟祥金. 应用昆虫学报. 2015(02)
本文编号：2915055
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