SD乳鼠原代心脏成纤维细胞培养及鉴定

发布时间：2020-12-18 04:38

　　目的:建立一种乳鼠心脏成纤维细胞分离、培养及鉴定的方法。方法:选取新出生的SD乳鼠,用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞;倒置显微镜观察细胞形态特征及生长情况,并进行Vimentin免疫组化对培养的原代细胞进行鉴定,观察原代细胞生长中出现污染情况。结果:差速贴壁60～90 min后镜下可见圆形细胞贴壁,2 d后可见细胞呈梭形、扁平形、三角形或多角形,且细胞数量增多、核分裂相增多;第3～4天时细胞生长约90%,免疫组化见细胞染色达90%以上,在原代细胞培养48 h时出现细菌污染。结论:成功建立一种稳定、有效的心脏成纤维细胞培养方法。 

【文章来源】：贵州医科大学学报. 2020年04期

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

原代培养的成纤维细胞(100×)

心脏主要由成纤维细胞、心肌细胞、血管内皮细胞及血管平滑肌细胞等组成。心脏成纤维细胞是心脏纤维化的关键效应细胞[7]心脏成纤维细胞的迁移及增殖能力极强，与心肌纤维化的发生发展息息相关[8-10]，与多种心脏疾病发生发展相关，如高血压性心肌肥厚、肥厚性心肌病、缺血性心肌病以及放射性心脏损伤等，故建立一种稳定、有效的体外心脏成纤维细胞对临床心血管疾病的研究、防治有着深远意义。图3 原代培养48 h时细菌污染结果(100×)

图2 免疫组化检测Vimentin在成纤维细胞表达(100×)目前关于心脏成纤维细胞的原代培养方法较多，大多都是从成年鼠或乳鼠心脏中分离培养[11-15]，也可从胚胎鼠心脏中分离培养心脏成纤维细胞[16]，较为常用的是酶消化法及组织块贴壁法。酶消化法包括单纯胰蛋白酶消化[17-18]、消化过夜再用Ⅱ型胶原蛋白酶消化[19-20]以及蛋白酶混合Ⅰ型胶原酶联合消化[14]。消化法是利用消化酶将基质、纤维等消化去除，从而使细胞分离出来。胰蛋白酶主要作用是分解蛋白质，对细胞膜破坏力强，消化细胞时若时间控制不好易造成细胞损伤。胶原酶以消化胶原为主，作用缓和。刘美丽等[21]取SD成年大鼠心脏成纤维细胞，对不同消化酶组合及不同时间点进行比较，最后发现单用胶原酶消化60 min所得细胞数量最多，且细胞状态佳、死亡率低、增值能力强等。


本文编号：2923368