雾化吸入抗NGF微球对哮喘小鼠气道重塑的作用及机制研究
发布时间：2020-12-22 17:05
研究背景和意义:支气管哮喘（简称哮喘）以气道非特异性炎症、气道高反应性及气道重塑为主要特征[1-3]。气道重塑被认为是哮喘难治性和不易控制的重要因素。尽管现有以糖皮质激素为代表,针对气道炎症的治疗,可以让多数哮喘患者得以控制。但是哮喘发病的慢性、易变性、发作性特征提示其发生机制的复杂性。近年来针对气道重塑的干预成为哮喘研究的热点[3,4],然而其启动机制及干预途径尚不甚清楚。研究表明,神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）与哮喘神经源性炎症、气道高反应性及气道重塑密切相关[5-10],然而针对NGF治疗哮喘的可行性及确切机制尚不清楚。研究目的:本研究在建立小鼠哮喘气道重塑模型基础上,探讨腹腔内注射和雾化吸入抗NGF抗体或微球对哮喘气道重塑的作用及可能对TGF-β/Smad信号通路的调节机制。研究方法:OVA致敏和激发建立小鼠气道重塑模型,用聚合物合金方法制备具有缓释性、长效性的抗NGF微球。采用腹腔注射NGF、腹腔注射抗NGF抗体、雾化吸入抗NGF和雾化吸入抗NGF微球进行干预。观察各干预组对气道炎症、气道反应性和气道重塑指标的影响。检测肺组织NGF和TGF-β...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图３．２对每组小鼠激发前后的平均肺气道阻力的进行比较（Ｍｃｈ浓度从６．２５?ｍｇ／ｍｌ增加到??
ＩＬ－１３的含量??为了探索抗－ＮＧＦ在气道炎症浸润的作用机制，采用ＮＧＦ和抗ＮＧＦ在哮喘??小鼠模型上做出对照性研宄分析。如图３．３所示，抗－ＮＧＦ组明显低于哮喘组（Ｐ??＜０．０５），与此相同变化的是嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、ＩＬ－?４、ＩＬ－１３的变化（Ｐ??＜０＿０５）。??Ａ?Ｂ??２００１?１８〇ｉ?＊??＋?■?ｃｏｎｔｒｏｌ?？?Ｉ??ｒ??ｆ１８０．?－Ａｓｔｈｍａ?１?１６０－?＇?Ｉ??Ｓ?１６０＇?Ｊ?？ＮＧＦ?Ｓ?１４０－?ＩＬ－１３?Ｉ??”０■?＿?Ａｎｔｉ－ＮＧＦ?？?１２〇．??２?１２０－國?＊?ｄ??￥１００■■丄?ｉ—?１?１〇°＇?Ｔ??＾?８〇．?ｍ?ｉｉ?；８〇－?１??ｉ?１１??Ｔｏｔａｌ?ｃｅｌｌｓ?Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ?Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ?ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａｓｔｈｍａ?ＮＧＦ?Ａｎｔｉ－ＮＧＦ??图３．３?（Ａ）抗ＮＧＦ治疗对ＢＡＬＦ细胞总数和细胞分类计数的影响；??（Ｂ）抗ＮＧＦ治疗对ＩＬ－４和ＩＬ－１３水平的影响；￥被认为是户＜０．０５，差异具有统计学意义。??３．３抗－ＮＧＦ治疗抑制哮喘小鼠气道炎症和气道重塑??为了确定抗－ＮＧＦ治疗参与气道重塑的发展程度，我们评估了所有哮喘小鼠??支气管旁的炎性细胞浸润，气道平滑肌层厚度和气道周围的胶原含量的多少。??每组的切片均行ＨＥ染色（图３．４）和行Ｍａｓｓｏｎ染色进行评估气道旁胶原的沉积情??况（
从π浴⑵?乐厮芗埃裕牵疲?穑?螅恚幔湫藕磐?罚崳?图３．５各组小鼠肺内切片ｍａｓｓｉｏｎ染色的病理结果（放大倍数ｍａｓｓｉｏｎｘ２００）??Ａ：无明显异常；Ｂ：有支气管旁Ｍａｓｓｏｎ染色的面积以及肺内气道旁胶原沉积增多；Ｃ：??支气管旁Ｍａｓｓｏｎ染色的面积以及肺内气道旁胶原沉积明显增加；Ｄ？？有少许Ｍａｓｓｏｎ染色??的面积以及肺内气道旁胶原沉积??３０?｜??ｉｉｌｌｌ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａｓｔｈｍａ?ＮＧＦ?Ａｎｔｉ－ＮＧＦ??图３．６各组气道旁胶原蛋白面积的定量评价。??抗ＮＧＦ组与哮喘组相比较，Ｐ＜０．０５。抗ＮＧＦ组与ＮＧＦ组相比较，户＜０．０５。??３．４抗ＮＧＦ治疗对肺组织中ＴＧＦ＿Ｐｉ和Ｐ－ｓｍａｄ３表达的影响??为了评估抗ＮＧＦ治疗对ＴＧＦ－Ｐｉ信号的影响，分析小鼠体内的ＴＧＦ－Ｐｉ在??ＢＡＬＦ以及肺组织样本的ＴＧＦ－Ｐｉ的表达。同时，为了证实抗ＮＧＦ治疗对哮喘的??影响，我们使用特异性抗体通过免疫组织化学来检查哮喘小鼠肺部的ＴＧＦ－卩！和??Ｐ－ｓｍａｄ３的表达。如图３．５Ｄ所示，在小鼠肺组织，各组的ＴＧＦ－Ｐｉ免疫组织化学??染色显示，每组的肺组织部分都有免疫阳性反应显色。ＴＧＦ－Ｉ３！主要分布在平滑??肌细胞的细胞质中，呈现为淡黄色至棕色，主要集中在气道上皮细胞、黏膜下??层、炎性细胞和血管平滑肌层。ＮＧＦ组在气道上皮细胞中表现出明显的强阳性??表现
【参考文献】：
期刊论文
[1]老年支气管哮喘急性发作期患者血清神经生长因子、白细胞介素-6和-25水平变化及意义[J]. 刘丽华,李鑫,刘忠,陆思静. 中国老年学杂志. 2017(05)
[2]肺部缓释微球治疗肺部疾病的性能及评价[J]. 王世寿,武刚. 中国组织工程研究. 2013(12)
[3]哮喘大鼠肺内神经生长因子的表达变化及与病理改变的关系[J]. 佘巍巍,杨新官. 西安交通大学学报(医学版). 2012(01)
[4]哮喘大鼠肺内神经生长因子表达与气道炎症的相关性[J]. 佘巍巍,蔡双启. 武汉大学学报(医学版). 2011(04)
[5]神经生长因子介导神经源性气道炎症机制探讨[J]. 佘巍巍,曾锦荣,王昌明,蔡双启. 重庆医学. 2011(02)
[6]抗神经生长因子干预对哮喘大鼠肺神经生长因子表达的影响[J]. 佘巍巍,杨新官,蔡双启. 中国老年学杂志. 2010(24)
[7]哮喘中Th1/Th2类细胞因子免疫失衡对神经生长因子表达的影响[J]. 欧阳若芸,胡成平,陈平,朱锦琪,黄信刚. 中南大学学报(医学版). 2007(01)
[8]神经生长因子调控哮喘神经源性炎症Ras-MAPK信号转导通路[J]. 汤渝玲,胡成平,冯俊涛,朱锦琪,林敏娟. 中南大学学报(医学版). 2006(03)
[9]神经生长因子、白血病抑制因子调控支气管哮喘大鼠神经源性炎症机制的研究[J]. 朱锦琪,冯俊涛,胡成平,汤渝玲,林敏娟,罗百灵. 中华结核和呼吸杂志. 2006(06)
[10]神经生长因子在哮喘患者诱导痰炎性细胞的表达[J]. 周敏,徐永健,熊盛道,赵建平,倪望,张珍祥. 中华内科杂志. 2003(11)
本文编号：2932108
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图３．２对每组小鼠激发前后的平均肺气道阻力的进行比较（Ｍｃｈ浓度从６．２５?ｍｇ／ｍｌ增加到??
ＩＬ－１３的含量??为了探索抗－ＮＧＦ在气道炎症浸润的作用机制，采用ＮＧＦ和抗ＮＧＦ在哮喘??小鼠模型上做出对照性研宄分析。如图３．３所示，抗－ＮＧＦ组明显低于哮喘组（Ｐ??＜０．０５），与此相同变化的是嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、ＩＬ－?４、ＩＬ－１３的变化（Ｐ??＜０＿０５）。??Ａ?Ｂ??２００１?１８〇ｉ?＊??＋?■?ｃｏｎｔｒｏｌ?？?Ｉ??ｒ??ｆ１８０．?－Ａｓｔｈｍａ?１?１６０－?＇?Ｉ??Ｓ?１６０＇?Ｊ?？ＮＧＦ?Ｓ?１４０－?ＩＬ－１３?Ｉ??”０■?＿?Ａｎｔｉ－ＮＧＦ?？?１２〇．??２?１２０－國?＊?ｄ??￥１００■■丄?ｉ—?１?１〇°＇?Ｔ??＾?８〇．?ｍ?ｉｉ?；８〇－?１??ｉ?１１??Ｔｏｔａｌ?ｃｅｌｌｓ?Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ?Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ?ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａｓｔｈｍａ?ＮＧＦ?Ａｎｔｉ－ＮＧＦ??图３．３?（Ａ）抗ＮＧＦ治疗对ＢＡＬＦ细胞总数和细胞分类计数的影响；??（Ｂ）抗ＮＧＦ治疗对ＩＬ－４和ＩＬ－１３水平的影响；￥被认为是户＜０．０５，差异具有统计学意义。??３．３抗－ＮＧＦ治疗抑制哮喘小鼠气道炎症和气道重塑??为了确定抗－ＮＧＦ治疗参与气道重塑的发展程度，我们评估了所有哮喘小鼠??支气管旁的炎性细胞浸润，气道平滑肌层厚度和气道周围的胶原含量的多少。??每组的切片均行ＨＥ染色（图３．４）和行Ｍａｓｓｏｎ染色进行评估气道旁胶原的沉积情??况（
从π浴⑵?乐厮芗埃裕牵疲?穑?螅恚幔湫藕磐?罚崳?图３．５各组小鼠肺内切片ｍａｓｓｉｏｎ染色的病理结果（放大倍数ｍａｓｓｉｏｎｘ２００）??Ａ：无明显异常；Ｂ：有支气管旁Ｍａｓｓｏｎ染色的面积以及肺内气道旁胶原沉积增多；Ｃ：??支气管旁Ｍａｓｓｏｎ染色的面积以及肺内气道旁胶原沉积明显增加；Ｄ？？有少许Ｍａｓｓｏｎ染色??的面积以及肺内气道旁胶原沉积??３０?｜??ｉｉｌｌｌ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａｓｔｈｍａ?ＮＧＦ?Ａｎｔｉ－ＮＧＦ??图３．６各组气道旁胶原蛋白面积的定量评价。??抗ＮＧＦ组与哮喘组相比较，Ｐ＜０．０５。抗ＮＧＦ组与ＮＧＦ组相比较，户＜０．０５。??３．４抗ＮＧＦ治疗对肺组织中ＴＧＦ＿Ｐｉ和Ｐ－ｓｍａｄ３表达的影响??为了评估抗ＮＧＦ治疗对ＴＧＦ－Ｐｉ信号的影响，分析小鼠体内的ＴＧＦ－Ｐｉ在??ＢＡＬＦ以及肺组织样本的ＴＧＦ－Ｐｉ的表达。同时，为了证实抗ＮＧＦ治疗对哮喘的??影响，我们使用特异性抗体通过免疫组织化学来检查哮喘小鼠肺部的ＴＧＦ－卩！和??Ｐ－ｓｍａｄ３的表达。如图３．５Ｄ所示，在小鼠肺组织，各组的ＴＧＦ－Ｐｉ免疫组织化学??染色显示，每组的肺组织部分都有免疫阳性反应显色。ＴＧＦ－Ｉ３！主要分布在平滑??肌细胞的细胞质中，呈现为淡黄色至棕色，主要集中在气道上皮细胞、黏膜下??层、炎性细胞和血管平滑肌层。ＮＧＦ组在气道上皮细胞中表现出明显的强阳性??表现
【参考文献】：
期刊论文
[1]老年支气管哮喘急性发作期患者血清神经生长因子、白细胞介素-6和-25水平变化及意义[J]. 刘丽华,李鑫,刘忠,陆思静. 中国老年学杂志. 2017(05)
[2]肺部缓释微球治疗肺部疾病的性能及评价[J]. 王世寿,武刚. 中国组织工程研究. 2013(12)
[3]哮喘大鼠肺内神经生长因子的表达变化及与病理改变的关系[J]. 佘巍巍,杨新官. 西安交通大学学报(医学版). 2012(01)
[4]哮喘大鼠肺内神经生长因子表达与气道炎症的相关性[J]. 佘巍巍,蔡双启. 武汉大学学报(医学版). 2011(04)
[5]神经生长因子介导神经源性气道炎症机制探讨[J]. 佘巍巍,曾锦荣,王昌明,蔡双启. 重庆医学. 2011(02)
[6]抗神经生长因子干预对哮喘大鼠肺神经生长因子表达的影响[J]. 佘巍巍,杨新官,蔡双启. 中国老年学杂志. 2010(24)
[7]哮喘中Th1/Th2类细胞因子免疫失衡对神经生长因子表达的影响[J]. 欧阳若芸,胡成平,陈平,朱锦琪,黄信刚. 中南大学学报(医学版). 2007(01)
[8]神经生长因子调控哮喘神经源性炎症Ras-MAPK信号转导通路[J]. 汤渝玲,胡成平,冯俊涛,朱锦琪,林敏娟. 中南大学学报(医学版). 2006(03)
[9]神经生长因子、白血病抑制因子调控支气管哮喘大鼠神经源性炎症机制的研究[J]. 朱锦琪,冯俊涛,胡成平,汤渝玲,林敏娟,罗百灵. 中华结核和呼吸杂志. 2006(06)
[10]神经生长因子在哮喘患者诱导痰炎性细胞的表达[J]. 周敏,徐永健,熊盛道,赵建平,倪望,张珍祥. 中华内科杂志. 2003(11)
本文编号：2932108
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/2932108.html
